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九分散-馬錢(qián)子成分的鑒定-凝膠電泳法

醫(yī)藥數(shù)據(jù)庫(kù)中心 藥學(xué)論壇 九分散-馬錢(qián)子成分的鑒定-凝膠電泳法
方法名稱:
九分散馬錢(qián)子成分的鑒定-凝膠電泳法
應(yīng)用范圍:

本方法采用凝膠電泳法定性檢測(cè)九分散中的馬錢(qián)子。

本方法適用于九分散的干燥根及根莖。
方法原理:
通過(guò)電泳分析,含馬錢(qián)子的中成藥九分散經(jīng)脫脂處理后,顯示出與馬錢(qián)子相吻合的5條主譜帶,充分說(shuō)明九分散中主要含有馬錢(qián)子。
試劑:

1. 甲叉雙丙烯酰胺(含量不低于98.5%)

2. 丙烯酰胺(含量不低于98.5%)

3. 三羥甲基氨基甲烷(含量不低于99.8%)

4. 甘氨酸(分析純)

5. 過(guò)硫酸銨(分析純)

6. 考馬斯亮蘭(進(jìn)口分裝)

儀器設(shè)備:

電泳儀

試樣制備:

1 樣品的制備

1.1單味藥材:稱取標(biāo)準(zhǔn)的中藥材馬錢(qián)子1G,加入Tris—HCl緩沖液5mL,研磨勻漿,離心20分鐘,上清液置冰箱中備用。

1.2中成藥:九分散由馬錢(qián)子、麻黃、乳香沒(méi)藥四味藥組成,其中乳香、沒(méi)藥均為樹(shù)脂類藥材,用乙醚多次溶解,脫去大部分樹(shù)脂,殘?jiān)鼡]盡乙醚后,同上法勻漿離心后備用。

2試劑的配制

2.1分離膠緩沖液(pH8.9):取36.6 gTris、48.0mL 1N HCl調(diào)pH8.9、加水至100mL。

2.2分離膠貯液:取28g丙烯酰胺(ACR),0.74gBis加水至100mL,過(guò)濾后使用。

2.3過(guò)硫酸銨溶液:0.56g過(guò)硫酸銨溶于100mL H2O中。

2.4濃縮膠緩沖液(pH6.7):5.98gTris、48.0mL 1N HCl調(diào)pH6.7,加水至100mL。

2.5濃縮膠貯液:10gACR,2.5gBis加水至100 mL,過(guò)濾后使用。

2.6核黃素溶液:4mg核黃素加水至100mL。

2.740%蔗糖溶液:40g蔗糖,加水至100mL。

2.8電極緩沖液:先配成貯液,6 gTris,28.8g甘氨酸,用水溶成100mL (pH8.3),用前再稀釋10倍。

操作步驟:

1. 電泳

分別取上述各種樣品的上清液各20μl,用微量注射器點(diǎn)樣于濃縮膠的樣品模子中,加入電極緩沖液,向上槽緩沖液中加入1~2滴溴酚蘭指示劑示蹤,電泳開(kāi)始后,電流控制在10mA,樣品進(jìn)入分離膠后加大到30mA,待指示劑行至末端1cm時(shí),即可停止電泳,約需2~3小時(shí)。

2.染色、脫色

取出膠板后,放入0.2%考馬斯亮蘭(R250)染色液中,在36℃染色1小時(shí),再用20%甲醇和7%HAC的脫色液在36℃進(jìn)行脫色,直至背景清晰為止,得到電泳圖譜。

參考文獻(xiàn):

王應(yīng)斌,穆仙麗,宿永成等. 中成藥九分散的PAGE分析. 內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2002,06:34

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