新清寧片—大黃素的測(cè)定—高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定新清寧片中大黃素的含量。

本方法適用于由熟大黃等幾味中藥制成的新清寧片。

供試品粉末置磨口錐形瓶中，精密加入無(wú)水乙醇，塞緊，稱(chēng)定重量，置水浴上加熱回流1h，放冷，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液，置燒瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-鹽酸（10:1)溶液，置水浴中加熱水解1h，立即冷卻，用氯仿強(qiáng)力振搖提取4次，合并氯仿液，置水浴上蒸干，殘?jiān)�用無(wú)水乙醇-醋酸乙酯（2:1)溶解，移置量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm)過(guò)濾，精密吸取續(xù)濾液10μL，注入高效液相色譜儀，用紫外檢測(cè)器檢測(cè)大黃素的吸收值，計(jì)算出其含量。

1. 甲醇（色譜純)

2. 無(wú)水乙醇、醋酸乙酯（分析純)

3. 大黃素（購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所)

1 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

Nucleosil ODS C₁₈柱（250mm×4.6mm，5μm)。

1.3 紫外檢測(cè)器

2 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：甲醇 水=85 15（含0.1%的磷酸)

2.2 柱溫：室溫

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm

2.4 流速：1.0mL/min

1. 稱(chēng)取供試品

取本品20片，除去包衣，精密稱(chēng)定，研細(xì)（過(guò)65目篩)，精密稱(chēng)取藥粉0.5g。

2. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取大黃素對(duì)照品適量，用無(wú)水乙醇-醋酸乙酯（2:1)溶解制成濃度為0.05mg/ml，作為對(duì)照品溶液。

3. 供試品溶液的制備

供試品粉末置磨口錐形瓶中，精密加入無(wú)水乙醇25ml，塞緊，稱(chēng)定重量，置水浴上加熱回流1h，放冷，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10ml，置燒瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇-鹽酸（10:1)溶液15ml，置水浴中加熱水解1h，立即冷卻，用氯仿強(qiáng)力振搖提取4次，每次15ml，合并氯仿液，置水浴上蒸干，殘?jiān)�用無(wú)水乙醇-醋酸乙酯（2:1)溶解，移置25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm)過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密吸取上述對(duì)照液2 、4 、6 、8、10μl進(jìn)樣，用紫外檢測(cè)器測(cè)定大黃素的吸收度值，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。

2. 供試品的測(cè)定

精密吸取上述供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外檢測(cè)器測(cè)定大黃素的吸收度值，計(jì)算出其含量。

苗明三，李振國(guó) 主編. 現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù). 北京：人民衛(wèi)生出版社，2000，83-84.