方法名稱:
玻璃酸酶的測(cè)定—玻璃酸酶測(cè)定法
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方法名稱: |
玻璃酸酶的測(cè)定—玻璃酸酶測(cè)定法 |
應(yīng)用范圍: |
本方法采用玻璃酸酶測(cè)定法測(cè)定玻璃酸酶的效價(jià)。 本方法適用于玻璃酸酶。 |
方法原理: |
精密稱取本品適量,加冷的水解明膠稀釋劑制成每1mL中約含1.5個(gè)單位的溶液,照玻璃酸酶測(cè)定法,測(cè)定玻璃酸酶的效價(jià)。 |
試劑: |
1. 醋酸-醋酸鉀緩沖液 2. 磷酸鹽緩沖液 3.水解明膠 4. 水解明膠稀釋劑 5. 血清貯備液 6. 血清溶液 7. 玻璃酸鉀貯備液 8. 玻璃酸鉀溶液
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儀器設(shè)備: |
可見分光光度計(jì) |
試樣制備: |
1. 醋酸-醋酸鉀緩沖液 取醋酸鉀 2. 磷酸鹽緩沖液 取磷酸二氫鈉 3.水解明膠 取明膠 4. 水解明膠稀釋劑 取磷酸鹽緩沖液與水各250mL,加水解明膠330mg搖勻,在0 5. 血清貯備液 取新鮮牛血清或凍干牛血清(先用水溶解并稀釋至標(biāo)示量體積)1份,加醋酸-醋酸鉀緩沖液9份稀釋,再以4mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.1,放置18-24小時(shí)后再用。在0 6. 血清溶液 血清貯備液中血清總固體(取牛血清適量,置裝有潔凈沙粒并在 7. 玻璃酸鉀貯備液 取預(yù)先經(jīng)五氧化二磷減壓干燥48小時(shí)的玻璃酸鉀,加水制成每1mL中含0.5mg的溶液。在 8. 玻璃酸鉀溶液 取玻璃酸鉀貯備液一份,用磷酸鹽緩沖液1份稀釋。臨用時(shí)配制。 9. 供試品溶液的制備 按估計(jì)單位精密稱取本品適量,加冷的水解明膠稀釋制成每1mL中約含1.5個(gè)單位的溶液,作為供試品溶液。臨用時(shí)配制。 10. 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取玻璃酸酶對(duì)照品適量,加冷的水解明膠稀釋制成每1mL中約含1.5個(gè)單位的溶液,作為對(duì)照品溶液。臨用時(shí)配制。 注:“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一!熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟: |
1.供試品的測(cè)定 取大小相同的試管6支,依次加供試品溶液0.20mL,0.30mL,0.40mL,各2支;再依次相應(yīng)加入水解明膠稀釋液0.30mL,0.20mL,0.10mL,每隔30秒鐘順序加入玻璃酸鉀溶液0.50mL,使每管的總體積為1.00mL,搖勻,置37℃± |
參考文獻(xiàn): |
中華人民共和國藥典,國家藥典委員會(huì)編,化學(xué)工業(yè)出版社,2005年版,二部,p.372。 |