玻璃酸酶的測(cè)定—玻璃酸酶測(cè)定法

本方法采用玻璃酸酶測(cè)定法測(cè)定玻璃酸酶的效價(jià)。

本方法適用于玻璃酸酶。

精密稱取本品適量，加冷的水解明膠稀釋劑制成每1mL中約含1.5個(gè)單位的溶液，照玻璃酸酶測(cè)定法，測(cè)定玻璃酸酶的效價(jià)。

1. 醋酸-醋酸鉀緩沖液

2. 磷酸鹽緩沖液

3.水解明膠

4. 水解明膠稀釋劑

5. 血清貯備液

6. 血清溶液

7. 玻璃酸鉀貯備液

8. 玻璃酸鉀溶液

1. 醋酸-醋酸鉀緩沖液

取醋酸鉀14g與冰醋酸20.5mL，加水使成1000mL。

2. 磷酸鹽緩沖液

取磷酸二氫鈉2.5g、無水磷酸氫二鈉1.0g與氯化納8.2g，加水使成1000mL。

3.水解明膠

取明膠50g，加水1000mL，在121℃加熱90分鐘，然后冷凍干燥。

4. 水解明膠稀釋劑

取磷酸鹽緩沖液與水各250mL，加水解明膠330mg搖勻，在0-4℃保存。如溶液不發(fā)生混濁，可繼續(xù)使用。

5. 血清貯備液

取新鮮牛血清或凍干牛血清（先用水溶解并稀釋至標(biāo)示量體積)1份，加醋酸-醋酸鉀緩沖液9份稀釋，再以4mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.1，放置18-24小時(shí)后再用。在0-4℃保存，應(yīng)可用30日。

6. 血清溶液

血清貯備液中血清總固體（取牛血清適量，置裝有潔凈沙粒并在105℃干燥至恒重)在8%左右著，取1份，用醋酸-醋酸鉀緩沖液3份；血清總固體在5%左右著，取一份，用醋酸-醋酸鉀緩沖液2份稀釋。臨用時(shí)配制。

7. 玻璃酸鉀貯備液

取預(yù)先經(jīng)五氧化二磷減壓干燥48小時(shí)的玻璃酸鉀，加水制成每1mL中含0.5mg的溶液。在0℃以下保存，可應(yīng)用30日。

8. 玻璃酸鉀溶液

取玻璃酸鉀貯備液一份，用磷酸鹽緩沖液1份稀釋。臨用時(shí)配制。

9. 供試品溶液的制備

按估計(jì)單位精密稱取本品適量，加冷的水解明膠稀釋制成每1mL中約含1.5個(gè)單位的溶液，作為供試品溶液。臨用時(shí)配制。

10. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取玻璃酸酶對(duì)照品適量，加冷的水解明膠稀釋制成每1mL中約含1.5個(gè)單位的溶液，作為對(duì)照品溶液。臨用時(shí)配制。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1.供試品的測(cè)定

取大小相同的試管6支，依次加供試品溶液0.20mL，0.30mL，0.40mL，各2支；再依次相應(yīng)加入水解明膠稀釋液0.30mL，0.20mL，0.10mL，每隔30秒鐘順序加入玻璃酸鉀溶液0.50mL，使每管的總體積為1.00mL，搖勻，置37℃±0.5℃水浴中；每管準(zhǔn)確保溫30分鐘后，每隔30秒順序取出，立即順序加入血清溶液4.0mL，搖勻，在室溫放置 30分鐘，搖勻，在640nm的波長處測(cè)定吸光度，同時(shí)以磷酸鹽緩沖液0.50mL代替玻璃酸鉀溶液，加水解明膠稀釋液0.50mL，搖勻，按上述方法自“置37℃±0.5℃水浴中”起同法操作，作為空白，計(jì)算，即得。