| 公開(公告)號 | CN1291029C |
| 公開(公告)日 | 2006.12.20 |
| 申請(專利)號 | CN200410084809.3 |
| 申請日期 | 2004.10.01 |
| 專利名稱 | 一種用菜豆間座殼菌真菌代謝的化合物及其制備方法 |
| 主分類號 | C12P17/18(2006.01)I |
| 分類號 | C12P17/18(2006.01)I;C07D493/08(2006.01)I;A61K31/366(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 廈門大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 林 昕;黃耀堅(jiān);徐慶研;鄭忠輝;宋思揚(yáng);蘇文金 |
| 地址 | 361005福建省廈門市思明南路422號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 馬應(yīng)森 |
| 國省代碼 | 福建;35 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種用真菌代謝產(chǎn)生的化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氫-2H-吡喃-3-基酯的制備方法，所說的真菌為菜豆間座殼菌(Diaporhe phaseolorum)HLY2，登記入冊的保藏編號為CCTCC NO：M 204061，所說的真菌代謝產(chǎn)生的化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氫-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene)的結(jié)構(gòu)式為：其特征在于其步驟為：1)液體培養(yǎng)及發(fā)酵液處理：取斜面上菌種接種于半海水配方馬鈴薯液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至發(fā)酵，發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌體，收集發(fā)酵液，分裝后加入體積為發(fā)酵液0.8～1.2倍的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，萃取時(shí)間為5～15h，收集萃取所得的有機(jī)相，在45～55℃減壓濃縮至膏狀；2)化合物的分離：取質(zhì)量為上樣量6～10倍的60～100目硅膠，用干法裝柱至硅膠的沉降不再變動，采用真空液相色譜法進(jìn)行洗脫，洗脫溶劑系統(tǒng)按極性從小到大的順序，由環(huán)己烷開始，環(huán)己烷與乙酸乙酯不同體積比混合溶劑，乙酸乙酯，乙酸乙酯與甲醇不同體積混合溶劑，最后至甲醇為洗脫溶劑，總共20級洗脫梯度進(jìn)行洗脫，收集每個梯度的洗脫液，45～55℃減壓濃縮至干，共收集20個回收組分，少量氯仿溶解后至于小管中自然揮干溶劑，若不溶，加入適量甲醇至完全溶解；所用的洗脫溶劑系統(tǒng)洗脫梯度為：環(huán)己烷、環(huán)己烷∶乙酸乙酯＝49∶1、環(huán)己烷∶乙酸乙酯＝48∶2、環(huán)己烷∶乙酸乙酯＝46∶4、環(huán)己烷∶乙酸乙酯＝42∶8、環(huán)己烷∶乙酸乙酯＝38∶12、環(huán)己烷∶乙酸乙酯＝34∶16、環(huán)己烷∶乙酸乙酯＝25∶25、環(huán)己烷∶乙酸乙酯＝16∶34、環(huán)己烷∶乙酸乙酯＝10∶40、乙酸乙酯、乙酸乙酯∶甲醇＝46∶4、乙酸乙酯∶甲醇＝42∶8、乙酸乙酯∶甲醇＝34∶16、乙酸乙酯∶甲醇＝25∶25、乙酸乙酯∶甲醇＝16∶34、乙酸乙酯∶甲醇＝1∶3、乙酸乙酯∶甲醇＝1∶4、乙酸乙酯∶甲醇＝1∶9、甲醇；3)選取步驟2)中收集的第8管回收組分，進(jìn)行進(jìn)一步硅膠柱分離，取質(zhì)量為上樣量6～10倍的60～100目硅膠，用干法裝柱至硅膠的沉降不再變動，采用真空液相色譜法進(jìn)行洗脫，洗脫溶劑系統(tǒng)按極性從小到大的順序，由環(huán)己烷∶三氯甲烷＝4∶1開始，直至三氯甲烷∶甲醇＝1∶8，總共18個洗脫梯度進(jìn)行洗脫，收集每個梯度的洗脫液，45～55℃減壓濃縮至干，共收集18個回收組分，少量氯仿溶解后至于小管中自然揮干溶劑，若不溶，加入適量甲醇至完全溶解；所說的洗脫溶劑梯度為：環(huán)己烷∶三氯甲烷＝4∶1、環(huán)己烷∶三氯甲烷＝3∶1、環(huán)己烷∶三氯甲烷＝2∶1、環(huán)己烷∶三氯甲烷＝1∶1、環(huán)己烷∶三氯甲烷＝1∶3、環(huán)己烷∶三氯甲烷＝1∶5、環(huán)己烷∶三氯甲烷＝1∶6、環(huán)己烷∶三氯甲烷＝1∶9、三氯甲烷、三氯甲烷∶甲醇＝30∶1、三氯甲烷∶甲醇＝20∶1、三氯甲烷∶甲醇＝15∶1、三氯甲烷∶甲醇＝10∶1、三氯甲烷∶甲醇＝8∶1、三氯甲烷∶甲醇＝5∶1、三氯甲烷∶甲醇＝1∶1、三氯甲烷∶甲醇＝1∶4、三氯甲烷∶甲醇＝1∶8；4)將步驟3)中回收組分的第7管的管壁上出現(xiàn)的透明針狀晶體，用甲醇溶解完全后常溫自然揮發(fā)溶劑進(jìn)行重結(jié)晶，得到透明針狀晶體，制得的真菌代謝產(chǎn)物為乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氫-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene)。 |
| 摘要 | 化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氫-2H-吡喃-3-基酯及其制備方法，涉及一種真菌代謝產(chǎn)生的化合物，尤其是一種利用新分離獲得的菜豆間座殼菌HLY2代謝產(chǎn)生的化合物Mycoepoxydiene，并將其作為抗腫瘤藥物或其他生物活性的先導(dǎo)物。其步驟為：液體培養(yǎng)及發(fā)酵液處理，壓濃縮至膏狀；取硅膠用干法裝柱至硅膠的沉降不再變動，洗脫；選取回收組分，進(jìn)一步硅膠柱分離，取硅膠用干法裝柱至硅膠的沉降不再變動，洗脫；將晶體用甲醇溶解后揮發(fā)溶劑重結(jié)晶，得到透明針狀晶體。可用于抗腫瘤藥物或其他生物活性的先導(dǎo)物。 |
| 國際公布 |
