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一種快速大量提純質(zhì)粒DNA的新方法

公開(公告)號(hào) CN1660878A  
公開(公告)日 2005.08.31  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200410081443.4  
申請(qǐng)日期 2004.12.10  
專利名稱 一種快速大量提純質(zhì)粒DNA的新方法  
主分類號(hào) C07H21/04  
分類號(hào) C07H21/04;C07H1/06  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 四川農(nóng)業(yè)大學(xué);王紅寧  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 王紅寧;汪洋;周生;胡慧瓊;余祖華;陳萍  
地址 625014四川省雅安市新康路四川農(nóng)業(yè)大學(xué)科技管理處  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu)  
代理人  
國(guó)省代碼 四川;51  
主權(quán)項(xiàng) 一種快速大規(guī)模提純質(zhì)粒DNA的新方法,其特征材料在于包括:(1)菌體清洗液,組分為0.1mmol/LNaCl,10mmol/LTris-HCl(pH8.0),1mmol/LEDTA(pH8.0);(2)菌體重懸緩沖液(R1),R1的組分為50mmol/L葡萄糖、25mmol/LTris-Cl(pH8.0),10mmol/LEDTA(pH8.0),200μgRnaseA;(3)菌體裂解液(R2),R2的組分為200mmol/LNaOH,1%SDS;(4)裂解中和液(R3),R3的組分為4mmol/LKAc,pH4.8;(5)異丙醇(R4),R4的組分為商業(yè)分析純?cè)噭?6)硅藻土懸液(R5),R5的組分為5克硅藻土與50ml7mol/鹽酸胍混合,取用時(shí)搖勻;(7)蛋白洗滌液(R6),R6的組分為50%乙醇,100mmol/LNaCl,10mmol/LTris-HCl(pH7.5),5mmol/LEDTA;(8)80%乙醇(R7),R7的組分為80%的分析純的乙醇;(9)DNA稀釋液(R8),R8的組分為TE緩沖液(10mmol/LTris-HClpH7.5,1mmol/LEDTA);(10)另需有若干50--100ml離心管。  
摘要 本發(fā)明涉及分子生物學(xué)研究領(lǐng)域,為一種簡(jiǎn)易快速大規(guī)模提純質(zhì)粒DNA的新方法。本方法所用試劑包括菌體清洗液、菌體重懸緩沖液、菌體裂解液、裂解中和液、異丙醇、硅藻土懸液、蛋白洗滌液、80%乙醇、DNA稀釋液九種試劑和50ml-100ml離心管。本發(fā)明與現(xiàn)有提純方法比較操作簡(jiǎn)便,一次提取僅需90分鐘。本發(fā)明結(jié)果穩(wěn)定,得量高,純度好,無蛋白質(zhì)和RNA污染,與應(yīng)用Qiagen柱式純化試劑盒和國(guó)產(chǎn)賽百盛樹脂型試劑盒提取相同的質(zhì)粒DNA比較,所得DNA的電泳條帶同樣清晰,無RNA混雜。本發(fā)明價(jià)格低廉,不需用酚和氯仿等有毒試劑,經(jīng)放大可用于DNA疫苗的制備。  
國(guó)際公布  
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