公開(公告)號(hào)
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CN1609221A
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公開(公告)日
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2005.04.27
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200310108025.5
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申請(qǐng)日期
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2003.10.20
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專利名稱
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人源甲硫氨酰氨肽酶1的表達(dá)方法及它在尋找抗腫瘤藥物中應(yīng)用
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主分類號(hào)
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C12N15/52
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分類號(hào)
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C12N15/52;C12N9/48;C12Q1/25
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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中國科學(xué)院上海藥物研究所
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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李佳;南發(fā)俊;葉其壯;李靜雅;羅群力;陳玲玲;崔永梅
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地址
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201203上海市浦東張江高科技園區(qū)祖沖之路555號(hào)
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頒證日
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國際申請(qǐng)
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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上海開祺專利代理有限公司
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代理人
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費(fèi)開逵;季良赳
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國省代碼
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上海;31
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主權(quán)項(xiàng)
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一種人源I型甲硫氨酰肽酶(HsMetAP1)及它的缺失突變(HsMetAP1Δ1-66,HsMetAP1Δ1-135)的表達(dá)方法,包括如下步驟:(1)設(shè)計(jì)不同的正、反向引物;(2)以人源膀胱細(xì)胞ECV304的總RNA為模板用RT-PCR方法得該細(xì)胞的cDNA,利用上述設(shè)計(jì)的引物和得到的cDNA用PCR方法得到HsMetAP1的編碼序列;(3)用內(nèi)切酶EcoRI和SalI雙酶切質(zhì)粒載體pGEX-KG用T4連接酶連接、純化得重組質(zhì)粒pGEX-KG/HsMetAP1;(4)將上述重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌表達(dá),經(jīng)提取、純化得活性蛋白HsMetAP1或HsMetAP1Δ1-66,HsMetAP1Δ1-135。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種人源I型甲硫氨酰氨肽酶HsMetAP1在原核生物大腸桿菌的表達(dá)系統(tǒng),并純化得到活性蛋白并找到了其活性關(guān)鍵結(jié)構(gòu)的要求;本發(fā)明公開了建立HsMetAP1的高通量篩選模型,應(yīng)用該模型篩選得到活性化合物,找到了活性化合物具有抑制腫瘤細(xì)胞生長的活性,以及人源I型甲硫氨酰氨肽酶與腫瘤之間的關(guān)系。
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國際公布
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