公開(公告)號 | CN1546671A |
公開(公告)日 | 2004.11.17 |
申請(專利)號 | CN200310115938.X |
申請日期 | 2003.12.16 |
專利名稱 | 重組人內皮抑素在大腸桿菌中的高效表達技術 |
主分類號 | C12N15/70 |
分類號 | C12N15/70;C12N15/12;C12N1/21;C12P21/02;//(C12N15/70,C12R1∶19) |
分案原申請?zhí)? | |
優(yōu)先權 | |
申請(專利權)人 | 中國科學院長春應用化學研究所 |
發(fā)明(設計)人 | 王群 |
地址 | 130022吉林省長春市人民大街5625號 |
頒證日 | |
國際申請 | |
進入國家日期 | |
專利代理機構 | |
代理人 | |
國省代碼 | 吉林;22 |
主權項 | 一種重組人內皮抑素在大腸桿菌中的高效表達技術,將重組質粒pBendo轉化表達型宿主菌E.coliBL21(DE3)中,篩選出陽性重組菌E.coliBL21-Endo,接種于2mL、含60~90μg/mL卡那霉素的LB培養(yǎng)液中,在細菌培養(yǎng)箱中,35~38℃,180~220rpm振蕩培養(yǎng)12~16h,然后將菌液接種于200mL、含60~90μg/mLKan的LB培養(yǎng)液中,36~38℃,200~250rpm振蕩培養(yǎng)2~3h,使菌液OD600nm在0.4~0.6,向菌液中加入終濃度為0.8~1.0mmol/L的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,在36~37℃下,180~200rpm繼續(xù)振蕩培養(yǎng)3~5h誘導內皮抑素的表達,表達量達到菌體總蛋白的38%。 |
摘要 | 本發(fā)明屬于重組人內皮抑素在大腸桿菌中高效表達的技術領域。將人內皮抑素基因其插入原核表達載體pET28b中構建重組表達質粒pBendo,然后轉化大腸桿菌BL21(DE3)中,篩選出陽性重組菌E.coli BL21-Endo,在含卡那霉素的LB培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng),使菌液OD600nm在0.4~0.6,加入終濃度為0.8~1.0m mol/L的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,繼續(xù)振蕩培養(yǎng)誘導內皮抑素的表達。重組內皮抑素蛋白表達量提高到菌體總蛋白的38%。 |
國際公布 |