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長(zhǎng)效重組組織因子途徑抑制物及其制備方法

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1528894A  
公開(kāi)(公告)日 2004.09.15  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN03151203.8  
申請(qǐng)日期 2003.09.25  
專利名稱 長(zhǎng)效重組組織因子途徑抑制物及其制備方法  
主分類號(hào) C12N15/12  
分類號(hào) C12N15/12;C12N15/63  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 復(fù)旦大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 馬端;宋后燕;白浩;張農(nóng)  
地址 200433上海市邯鄲路220號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 上海正旦專利代理有限公司  
代理人 包兆宜  
國(guó)省代碼 上海;31  
主權(quán)項(xiàng) 一類重組組織因子途徑抑制物(TFPI)長(zhǎng)效突變體,命名為長(zhǎng)效組織因子途徑抑制物(LTFPI),其特征在于TFPI羧基末端267-304區(qū)域內(nèi)的某些基酸突變后具有序列1的氨基酸序列,所述LTFPI的半衰期較TFPI延長(zhǎng)10倍以上,具有抗組織因子、凝血因子VII/VIIa和凝血因子X(jué)/Xa功能。  
摘要 本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及長(zhǎng)效組織因子途徑抑制物(LTFPI)及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明對(duì)組織因子途徑抑制物(TFPI)及其受體低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白(LRP)的生物信息學(xué)和結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)分析和實(shí)驗(yàn),確定了TFPI羧基末端與LRP結(jié)合并被清除的部位。設(shè)計(jì)了TFPI羧基末端突變體,通過(guò)PCR定點(diǎn)突變構(gòu)建LTFPI基因后,與原核或真核表達(dá)載體重組,轉(zhuǎn)化大腸桿菌或畢赤酵母,篩選高表達(dá)工程菌。原核工程菌經(jīng)發(fā)酵擴(kuò)增,破碎細(xì)菌,離心收集包涵體,復(fù)性后經(jīng)分子篩和離子交換二步法純化LTFPI;真核工程菌直接將上清進(jìn)行二步純化。獲得的LTFPI半衰期明顯延長(zhǎng),具有良好的抗凝功能。  
國(guó)際公布  
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