人鼻咽組織特異性基因NASG編碼蛋白及其抗體的制備
|
公開(公告)號(hào)
|
CN1482244A
|
|
公開(公告)日
|
2004.03.17
|
|
申請(qǐng)(專利)號(hào)
|
CN02139605.1
|
|
申請(qǐng)日期
|
2002.09.13
|
|
專利名稱
|
人鼻咽組織特異性基因NASG編碼蛋白及其抗體的制備
|
|
主分類號(hào)
|
C12N15/12
|
|
分類號(hào)
|
C12N15/12;C07K14/435;C07K14/47;C07K16/18
|
|
分案原申請(qǐng)?zhí)? |
|
|
優(yōu)先權(quán)
|
|
|
申請(qǐng)(專利權(quán))人
|
中南大學(xué)
|
|
發(fā)明(設(shè)計(jì))人
|
李桂源;張必成;李小玲;沈守榮
|
|
地址
|
410083湖南省長(zhǎng)沙市麓山南路
|
|
頒證日
|
|
|
國(guó)際申請(qǐng)
|
|
|
進(jìn)入國(guó)家日期
|
|
|
專利代理機(jī)構(gòu)
|
中南大學(xué)專利中心
|
|
代理人
|
龔燦凡
|
|
國(guó)省代碼
|
湖南;43
|
|
主權(quán)項(xiàng)
|
一種人鼻咽組織特異性基因NASG編碼蛋白的制備方法，其特征在于：本發(fā)明利用鼻咽組織特異性基因和鼻咽癌易感基因，對(duì)在鼻咽組織特異性表達(dá)且在鼻咽癌表達(dá)下調(diào)基因NASG的編碼蛋白，其具體方案為：1>GST/NASG融合蛋白的原核表達(dá)：①據(jù)原核表達(dá)載體pEGX-4T-2的GST閱讀框架設(shè)計(jì)引物，使NASG基因的編碼區(qū)閱讀框與GST的閱讀框架一致；②以成人鼻咽cDNA文庫(kù)為模板，PCR擴(kuò)增NASG基因的編碼區(qū)，回收PCR產(chǎn)物條帶；③將pEGX-4T-2載體分別與NASG基因連接，構(gòu)建成符合讀框的融合基因；④挑單個(gè)陽(yáng)性菌落接種入含氨卞青霉素(100μg/ml)的2ml LB培養(yǎng)液中，37℃，過夜培養(yǎng)；將50μl過夜培養(yǎng)物分別接種到5ml含氨卞青霉素(100μg/ml)的LB培基中，于37℃培養(yǎng)2h，加入IPTG至終濃度為1mmol/L，37℃，在培養(yǎng)的不同時(shí)刻各取1ml轉(zhuǎn)移至微量離心管中，離心去上清，將沉淀重懸于25μl TE中，再加25μl 2×SDS凝膠加樣緩沖液中，混勻菌液，20kHz超聲破碎，收集上清液；在12％SDS-聚丙烯酰胺凝膠中各加15μl上清進(jìn)行電泳，80-120V室溫電泳8h，考馬斯亮藍(lán)染色，觀察到NASG融合蛋白的表達(dá)；2>融合蛋白的分離純化：用谷胱苷肽Sepharose 4B過柱分離、純化融合蛋白。
|
|
摘要
|
人鼻咽組織特異性基因NASG編碼蛋白及其抗體的制備。本發(fā)明采用成人鼻咽組織cDNA制備檢測(cè)子(tester)，以成人食管、肺、肝、心、胃、脾、肌肉、腎和皮膚cDNA制備驅(qū)趕子(driver)，采用抑制性消減雜交技術(shù)獲得14個(gè)鼻咽差異表達(dá)基因的cDNA片段。NASG基因在人鼻咽組織特異性表達(dá)且在鼻咽癌中表達(dá)下調(diào)(34/48)，NASG編碼產(chǎn)物及其抗體的制備將為鼻咽癌的基因診斷和治療提供新的手段�；蛟\斷的特點(diǎn)是靈敏度高、特異性強(qiáng)、取材一般不受組織或時(shí)相限制，能夠?qū)崿F(xiàn)鼻咽癌的早診斷、早發(fā)現(xiàn)和早治療。是一種全新的治療策略，有望實(shí)現(xiàn)鼻咽癌的無創(chuàng)傷性、根治性治療。
|
|
國(guó)際公布
|
|
...
