關(guān)于雛鴨
病毒性肝炎診斷問(wèn)題
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鴨病毒性肝炎（duckvireshepatitis，DVH)是由鴨肝炎病毒（duckhepatitisvires，DHV)引起的雛鴨急性敗血性、高度致死性傳染病，其特征是患鴨呈現(xiàn)沉郁、轉(zhuǎn)圈、
抽搐、角弓反張等神經(jīng)癥狀，并具有肝臟腫脹、出血，膽囊充盈，膽汁顏色變淡等病理變化。鴨肝炎呈世界分布，其病原具有三個(gè)抗原性互不相關(guān)的血清型（血清Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型)。我國(guó)自1958年在上海發(fā)現(xiàn)本病至1996年前后，各地暴發(fā)與流行的鴨肝炎病原均屬于標(biāo)準(zhǔn)DHV-I型，其疫情可以被標(biāo)準(zhǔn)DHV-I型疫苗及抗體良好控制。1996年福建林世棠報(bào)道在福州地區(qū)發(fā)現(xiàn)不能被標(biāo)準(zhǔn)DHV-I型疫苗保護(hù)的鴨肝炎，1997年3月廣東珠江三角洲及其附近地區(qū)大面積暴發(fā)典型DVH，在使用傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)DHV-I型弱毒疫苗及其蛋黃抗體防制時(shí)，控制結(jié)果出現(xiàn)多樣性。部分疫情可以用標(biāo)準(zhǔn)DHV-I型高免蛋黃抗體控制，免疫保護(hù)率達(dá)95%以上;部分疫情用標(biāo)準(zhǔn)DHV-I型高免蛋黃抗體控制不力，往往需要重復(fù)注射抗體1～2次，免疫保護(hù)率在75%左右;部分疫情用標(biāo)準(zhǔn)DHV-I型高免蛋黃抗體控制的效果很差，發(fā)病死亡率在80%～90%，但使用本地分離強(qiáng)毒制備的高免蛋黃抗體或高免血清則可控制。珠江三角洲及其附近地區(qū)正在大面積流行DHV-I型鴨肝炎，其部分毒株的毒力有所增強(qiáng)，其抗原性發(fā)生了變異，使得所流行的DVH發(fā)病日齡、發(fā)病死亡率均有增大傾向，采用DHV-I標(biāo)準(zhǔn)毒株的弱毒疫苗或相應(yīng)高免蛋黃抗體的防制效果出現(xiàn)多樣化，甚至常發(fā)生免疫失敗。因此，建立有效準(zhǔn)確的診斷方法和防制對(duì)策對(duì)本病的預(yù)防有重大意義。 1 診斷 1.1 臨床診斷 本病主要感染3周齡以內(nèi)的雛鴨，3～10日齡的雛鴨為高易感群體。潛伏期很短，為1～4天，雛鴨突然發(fā)病，開始時(shí)病鴨表現(xiàn)精神萎靡，不能隨群走動(dòng)，眼睛半閉，
嗜睡。出現(xiàn)這些癥狀1～3h后表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，運(yùn)動(dòng)失調(diào)，身體倒向一側(cè)，雙腿作痙攣性運(yùn)動(dòng)，呈角弓反張姿態(tài)，俗稱"背脖病"。通常在出現(xiàn)神經(jīng)癥狀后，十幾分鐘即死亡。有些發(fā)病急的病雛鴨往往突然倒斃，�？床坏饺魏伟Y狀。 1.2 病理變化 本病的主要病理變化是在肝臟。肝腫大，質(zhì)脆，色暗或發(fā)黃，肝表面有大小不等的出血斑點(diǎn)。多數(shù)病鴨的腎臟發(fā)生出血和腫脹，膽囊腫脹。組織學(xué)變化的特征是肝細(xì)胞變性和壞死，部分肝細(xì)胞脂肪變性。 1.3 病毒分離 Ⅰ型鴨肝炎病毒分離可無(wú)菌采取雛鴨肝臟制成懸液，加氯仿，離心取上清液，經(jīng)尿囊腔接種8～10日齡雞胚或10～14日齡鴨胚，觀察胚體的病變和死亡情況，收集尿囊液。用病料或收獲的尿囊液經(jīng)肌肉接種易感雛鴨，經(jīng)24～48h死亡，若具有DVH的典型特征和癥狀，并且也能從死亡雛鴨中分離到病毒，即可證實(shí)此病。也可用直接熒光抗體技術(shù)在自然病例或接種鴨胚的肝臟上進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的診斷。 Ⅱ型鴨肝炎病毒分離較困難，需要在雞胚尿囊腔內(nèi)連續(xù)傳代。敏感雛鴨對(duì)Ⅱ型DVH攻擊的反應(yīng)是多種多樣的。Ⅱ型鴨肝炎病毒最可靠的診斷方法是用電鏡觀察肝勻漿，檢出星狀病毒。 Ⅲ型鴨肝炎的檢測(cè)方法是對(duì)10日齡的鴨胚經(jīng)絨毛尿囊膜接種病料，觀察接種部位和胚胎的病變。 1.4 血清學(xué)方法 血清學(xué)方法包括用雞胚、鴨胚、雛鴨以及用細(xì)胞培養(yǎng)的病毒進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)、被動(dòng)血凝實(shí)驗(yàn)、間接血凝實(shí)驗(yàn)、膠體金免疫電鏡技術(shù)、SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)，以及酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)等。 1.4.1 血凝實(shí)驗(yàn) 孫泉云等粗提DHV經(jīng)Sephadex6200柱層析純化后作為致敏用抗原，
戊二醛法固定
綿羊紅細(xì)胞、BDB法致敏抗原紅細(xì)胞，建立了檢測(cè)DHV抗體的間接血凝試臉，其最佳致敏條件為：50%醛化紅細(xì)胞0.1ml，BDB2ml，DHV抗原0.5mg，37℃15min。本試驗(yàn)還對(duì)不同
鴨血清的IHA抗體及免疫雛鴨的抗體水平等進(jìn)行了檢測(cè)，經(jīng)與中和試驗(yàn)比較，陽(yáng)性結(jié)果符合率較高。 1.4.2 中和實(shí)驗(yàn) 秦智鋒等將鴨病毒性肝炎病毒（ATCC株)用雞胚傳一代后，測(cè)出此病毒的雞胚半數(shù)致死量（ELD50)，通過(guò)多次重復(fù)試驗(yàn)，建立了利用雞胚中和試驗(yàn)和雛鴨中和試驗(yàn)檢測(cè)鴨病毒性肝炎（DVH)的診斷方法。雛鴨中和試驗(yàn)是在本體動(dòng)物上進(jìn)行試驗(yàn)，靈敏度高，判斷準(zhǔn)確。特別是鴨體本身的癥狀與病變對(duì)于確證該病非常有說(shuō)服力。且與雞胚中和試驗(yàn)相比，其所需周期短，操作相對(duì)簡(jiǎn)單。但由于個(gè)體之間的差異，各個(gè)體之間相對(duì)抵抗力不同，所以重復(fù)性較差。雞胚中和試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，其死亡的胚體病變也具有特征性。但有些分離到的病毒不能初次就在雞胚上增殖，需
盲傳2～3代后方有特征性的病變。此外，雞胚試驗(yàn)所需時(shí)限長(zhǎng)，不能適應(yīng)快速診斷的要求。 1.4.3 瓊脂免疫擴(kuò)散 許偉琦等選擇接毒后48～72h死亡的含毒量最高峰時(shí)期的雞胚體作為抗原材料，通過(guò)反復(fù)研磨凍融和超聲波裂解使抗原成分充分暴露，并用氯仿抽提除去類脂質(zhì)和雜蛋白，以PEG透析和硫酸銨沉淀法來(lái)濃縮和純化病毒，克服了非特異性反應(yīng)，并在瓊脂糖板內(nèi)加入2% PEG，大大加快沉淀反應(yīng)，24h即能做結(jié)果判定，而且提高了沉淀線清晰度。 1.4.4 膠體金標(biāo)記 程安春等用經(jīng)過(guò)初步提純的DHV制備的高免血清經(jīng)過(guò)非特異性吸收，同時(shí)對(duì)觀察用的病毒樣品及抗血清用前經(jīng)13000r/min處理，去掉一些雜質(zhì)，使制備的免疫膠體金樣品在電鏡視野下基本看不到雜質(zhì)，非常清晰，用膠體金免疫電鏡技術(shù)和直接電鏡（DEM)、免疫電鏡（IEM)比較觀察了鴨肝炎病毒，觀察到待檢病毒，免疫膠體金比DEM、IEM法清晰。視野中附著金顆粒的病毒量多，很容易就觀察到，而不像DEM和IEM那樣，由于背景雜質(zhì)多，景像不清，病毒量少，鏡下尋找較困難。膠體金免疫電鏡技術(shù)是在免疫電鏡基礎(chǔ)上，加進(jìn)在電鏡下具有強(qiáng)烈反差的金顆粒，故大大提高了檢測(cè)效果。膠體金免疫電鏡技術(shù)可用于檢測(cè)鴨病毒性肝炎病毒，具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、直觀等特點(diǎn)，可作為快速檢測(cè)鴨病毒性肝炎病毒的常規(guī)方法。 張小飛等用膠體金標(biāo)記提純后的
兔抗鴨肝炎病毒（DHV)IgG，建立了一種以微孔濾膜為固相載體，以紅色膠體金為標(biāo)記物的檢測(cè)DHV的斑點(diǎn)免疫金滲濾法（DIC-FA)，并確定了最佳試驗(yàn)條件。該法既可定性，亦可定量，其敏感性為抗原斑點(diǎn)試驗(yàn)（AST)的2倍。特異性阻斷試驗(yàn)和交叉反應(yīng)試驗(yàn)證明DIGFA檢測(cè)DHV具有較高的特異性。對(duì)DHV雞胚尿囊液DIGFA法檢出率為100%。DIGFA法是一種微量、敏感、特異、快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)DHV方法。 1.4.5 SPA協(xié)同凝集試驗(yàn) SPA是大多數(shù)金色
葡萄球菌細(xì)胞壁上所含的一種主要成分。SPA能天然地和人類IgG分子Fc段結(jié)合的特點(diǎn)，克服了ELISA中酶標(biāo)抗體或酶標(biāo)抗體特異性的局限。酶標(biāo)SPADotBlotlmmunoassay簡(jiǎn)化了DHV的抗原、抗體的免疫檢測(cè)方法，對(duì)篩選DHV病毒的敏感細(xì)胞株和單克隆抗體的特異性檢測(cè)等，在特異性、重復(fù)性及定性、定量等諸多方面，都獲得了較滿意的效果。 1.4.6 ELISA診斷法 其優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，特異性強(qiáng)。 ELISA雙抗夾心法 陳溥言等建立了ELISA雙抗夾心法以檢測(cè)病毒，將其研制的單抗應(yīng)用于病毒的檢測(cè)，能夠靈敏地檢測(cè)病毒樣品。 單抗捕捉法ELISA 孫泉云等將單抗的高度特異性與ELISA的高度靈敏性結(jié)合起來(lái)，建立了用以檢測(cè)DHV抗體的單抗捕捉法ELISA方法。該法能有效區(qū)分陰、陽(yáng)性血清，非特異性背景很小。同時(shí)對(duì)抗原的純度要求也很低，甚至是尿囊液也能克服非特異性反應(yīng)。 酶標(biāo)Dot-ELISA 楊奎等采用過(guò)碘酸鈉法將
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記在純化的DHV上，建立了酶標(biāo)Dot-ELISA法用于檢測(cè)DHV抗體。與以Polyvinyl板或Polystyrene為固相載體的ELISA法相比，酶標(biāo)Dot-ELISA方法抗原用量少，很適于DHV這類難以提純的病毒的抗體的檢測(cè)。馬秀麗等采用過(guò)碘酸鈉法用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記純化的Ⅰ型鴨肝炎病毒單克隆抗體建立了檢測(cè)Ⅰ型鴨病毒性肝炎的Dot-ELISA方法。該方法簡(jiǎn)便易行，特異性好，與鴨瘟病毒、小鵝瘟病毒、雞傳染性囊病病毒、雞新城疫病毒等無(wú)交叉反應(yīng)，重復(fù)性高，對(duì)病毒尿囊液的最低檢出范圍為1∶16，而對(duì)肝臟病料的最低檢出范圍為1∶160。該方法可用于臨床發(fā)病鴨的檢測(cè)。 間接ELISA 楊萍萍等制備了雞抗DHV高免血清，并成功地用葡聚糖凝膠柱層析純化抗原包被酶標(biāo)板，建立了檢測(cè)雞抗DHV血清抗體的間接ELISA方法，經(jīng)交叉試驗(yàn)和阻斷試驗(yàn)表明，該方法具有很高的敏感性和特異性，應(yīng)用于DHV抗體檢測(cè)比較有效。 由于鴨肝炎病毒有多種血清型并且病毒難以分離和純化，至今沒(méi)見其他關(guān)于DVH的分子生物學(xué)診斷方法的報(bào)道。 2 防制措施 目前還沒(méi)有有效的化學(xué)藥物對(duì)雛鴨病毒性肝炎進(jìn)行治療，因此該病重在免疫預(yù)防。 2.1 主動(dòng)免疫 2.1.1 弱毒疫苗 程安春等將DHV通過(guò)雞胚連續(xù)傳代致弱而獲得疫苗株，對(duì)種鴨和雛鴨進(jìn)行免疫。種鴨在收集種蛋前2～4周注射疫苗，雛鴨于3周內(nèi)可獲得母源抗體保護(hù)，一般免疫期為6個(gè)月，5～6個(gè)月后應(yīng)考慮第二次免疫;雛鴨在1日齡免疫弱毒疫苗，3～7天可產(chǎn)生免疫力，但母源抗體可影響效果，對(duì)有母源抗體的1日齡雛鴨采用口服免疫的效果優(yōu)于注射免疫。但由于某些地區(qū)出現(xiàn)Ⅰ型變異株疫情，用標(biāo)準(zhǔn)DHVI型弱毒疫苗或其抗體控制的效果呈現(xiàn)明顯的多樣性，部分基本可以控制，部分控制效果很差。這就是目前部分地區(qū)采用標(biāo)準(zhǔn)鴨肝炎Ⅰ型（DHV I型)的弱毒疫苗免疫效果不好的原因。 2.1.2 滅活疫苗 國(guó)內(nèi)外有雞胚和鴨胚組織滅活苗，并證明鴨胚滅活苗比雞胚滅活苗效果好。但如果沒(méi)有弱毒苗的基礎(chǔ)免疫，只使用滅活苗的抗體效價(jià)很低。由于母源抗體的存在會(huì)影響免疫效果，因此沒(méi)有母源抗體的雛鴨才可以進(jìn)行免疫。對(duì)存在母源抗體或情況不明的雛鴨可肌肉注射高免血清或蛋黃抗體進(jìn)行預(yù)防。免疫效果除了受母源抗體的影響外，還受暴露于強(qiáng)毒的時(shí)間和嚴(yán)重程度的影響。如果雛鴨在出殼后早期暴露于強(qiáng)毒，特別是雛鴨病毒性肝炎呈地方性流行及嚴(yán)重感染的地區(qū)，其免疫效果也會(huì)降低。采用適當(dāng)?shù)男l(wèi)生措施有助于解決這一問(wèn)題。 2.1.3 二聯(lián)和多聯(lián)疫苗 陶淑珍等針對(duì)雛鴨的二種主要傳染病鴨漿膜炎、鴨病毒性肝炎制備的二聯(lián)滅活疫苗，免疫2周齡雛鴨;2周后攻毒鴨漿膜炎保護(hù)力達(dá)6/8上，鴨病毒性肝炎保護(hù)力達(dá)7/8以上;雛鴨免疫持續(xù)期可達(dá)12周以上，種鴨免疫后DHV抗體保護(hù)持續(xù)期1個(gè)月以上，并對(duì)疫苗的保存期進(jìn)行試驗(yàn)證明二聯(lián)滅活疫苗效果理想。 鴨肝炎病毒和鴨瘟病毒二聯(lián)疫苗 張大丙等將雛鴨肝炎病毒和鴨瘟病毒的雞胚弱毒分別免疫1日齡易感雛鴨，經(jīng)攻毒試驗(yàn)和中和試驗(yàn)，雛鴨5日齡時(shí)能分別抵抗各自強(qiáng)毒攻擊，說(shuō)明這兩株弱毒在同一鴨體內(nèi)都能迅速產(chǎn)生免疫力，互不干擾�？锅喐窝撞《镜目贵w消長(zhǎng)規(guī)律、抗鴨瘟病毒強(qiáng)毒攻擊的保護(hù)情況分別與各自單苗一致。攻毒試驗(yàn)還表明，二聯(lián)疫苗針對(duì)DPV的免疫期在2個(gè)月以上，也未受到DHV弱毒的影響，從抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果看，二聯(lián)疫苗免疫雛鴨抗DHV中和抗體消長(zhǎng)曲線與單苗情況也一致，因而針對(duì)DHV的免疫期也未受到DPV弱毒"的干擾。野外實(shí)驗(yàn)亦表明，DHV、DPV兩株弱毒同時(shí)免疫也可以獲得分別免疫單苗的效果。結(jié)果表明，分屬于兩個(gè)病毒科的DHV、DPV弱毒進(jìn)入同一鴨體互不干擾對(duì)方的增殖并至少在2個(gè)月內(nèi)互不干擾對(duì)方的免疫力的產(chǎn)生和維持。 程安春等對(duì)鴨瘟一鴨病毒性肝炎二聯(lián)疫苗的配比、穩(wěn)定性、保護(hù)條件、保存期、攻毒試驗(yàn)、免疫后抗體消長(zhǎng)規(guī)律及二聯(lián)疫苗的田間試驗(yàn)、免疫途徑等進(jìn)行了比較全面的研究，也證明了二聯(lián)苗免疫成鴨的效果與各自單苗基本一致。 2.2 被動(dòng)免疫 采用出殼鴨苗于24～28h內(nèi)注射鴨病毒性肝炎蛋黃液，配合人用乙肝
中草藥劑效果尤佳，可獲100%保護(hù)�？祻�(fù)鴨血清和高免血清中都含有能中和病毒的抗體，可用于治療病鴨或用于被動(dòng)免疫，效果良好。 用雞接種鴨DVH病毒油劑滅活疫苗，強(qiáng)化免疫，能獲得相應(yīng)特異性蛋黃抗體，防治鴨DVH病具有良好的效果，也能避免應(yīng)用同源蛋黃液可能帶來(lái)的疫病傳播。 據(jù)國(guó)外研究報(bào)道，不同血清型病毒在血清學(xué)上有著明顯的差異，無(wú)交叉免疫性。因此，雛鴨發(fā)病后，即使使用高免血清或高免蛋黃也不一定產(chǎn)生良好的效果，如果是同一血清型效果肯定好。而注射高免血清或蛋黃次數(shù)及注射后能產(chǎn)生多大保護(hù)率尚沒(méi)有確切的數(shù)據(jù)，臨床使用時(shí)可根據(jù)病情而定。 另外，四川農(nóng)業(yè)大學(xué)禽病防治研究中心已研制出抗鴨病毒性肝炎二價(jià)（Ⅰ＋Ⅲ型)高免抗體，1日齡雛鴨皮下注射1m1即可有效預(yù)防Ⅰ型和Ⅲ型雛鴨病毒性肝炎，治療劑量2～3ml/只，具有良好效果。對(duì)種鴨可在開產(chǎn)前15～30天進(jìn)行1～2次免疫，可保護(hù)下一代雛鴨不患Ⅰ型和Ⅲ型雛鴨病毒性肝炎。 2.3 中草藥 中草藥的作用在于，調(diào)理機(jī)體的氣血，疏肝理脾，調(diào)整機(jī)體的代謝功能和免疫功能。順克巧等用
茵陳、
龍膽草、
黃芩、
黃柏、
梔子、
柴胡、
板藍(lán)根、雙花、
防風(fēng)等疏肝理氣、調(diào)整氣血、清熱解毒等中草藥，治療鴨病毒性肝炎。整個(gè)試驗(yàn)觀察5天，死亡率為5.37%，比抗體對(duì)照組、空白對(duì)照組的死亡率分別低6%和近57%。祝建新等用自配的"鴨肝散"制劑（茵陳、龍
膽草、黃芩、黃柏、
金銀花、板藍(lán)根、梔子、柴胡、防風(fēng)、
鉤藤、
神曲、
荊芥、
甘草等13味中藥經(jīng)炮制按比例混合后煎熬兩次，煎液合并濃縮至含生藥0.5g/m1)治療鴨病毒性肝炎，其效果與高免蛋黃抗體相當(dāng)，而且不易復(fù)發(fā)。
畜牧導(dǎo)航:
養(yǎng)鴨資訊 養(yǎng)鴨技術(shù) 鴨價(jià)格行情 鴨病防治 飼養(yǎng)管理 養(yǎng)鴨問(wèn)答
