犬細(xì)小病毒感染(canine parvovirus infection)是由犬細(xì)小病毒(Canine parvovirus, CPV)感染引起的,以嚴(yán)重腸炎綜合征和心肌炎綜合征為特征的犬科和鼬科動物的重要傳染病。本病可發(fā)生于世界各地,幼犬發(fā)病率和死亡率很高。
本病于1978年同時在澳大利亞和加拿大證實以來,已在世界很多地區(qū)相繼發(fā)現(xiàn)。我國于1982年證實此病之后,在東北、華東和西南等地區(qū)的警犬和良種犬中陸續(xù)發(fā)生和蔓延。
病原CPV屬于細(xì)小病毒科(Parvoviridae)細(xì)小病毒屬{Parvovirus)。病毒粒子呈圓形,直徑20~24nm,呈二十面體對稱,無囊膜,由32個殼粒組成;蚪M為單股線狀DNA,在DNA兩端各有一個發(fā)夾樣的回紋結(jié)構(gòu)。DNA編碼病毒有3種結(jié)構(gòu)多肽(VP1,VP2,VP3),其中VP2是病毒的主要結(jié)構(gòu)成分。
CPV對外界理化因素抵抗力非常強,這與其化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)特點有關(guān),如病毒無囊膜,不含脂類和糖類,結(jié)構(gòu)堅實緊密等。糞便中的病毒可存活數(shù)月至數(shù)年,4~10℃可存活半年以上。病毒對乙醚、氯仿、醇類和去氧膽酸鹽有抵抗力,但對紫外線、福爾馬林、β-丙內(nèi)酯、次氯酸鈉、氨水和氧化劑等消毒劑敏感。
CPV具有較強血凝活性,在4℃,pH6.0~7.2條件下可牢固地凝集豬和猴的紅細(xì)胞。CPV可在多種不同類型的細(xì)胞內(nèi)增殖,如在貓和犬的腎、肺、腸原代和傳代細(xì)胞內(nèi)能很好地生長,也可在犬的胸腺細(xì)胞、水貂肺細(xì)胞、浣熊的睡液腺細(xì)胞以及牛胎兒脾細(xì)胞中增殖和傳代。貓腎細(xì)胞系F81是較常用的細(xì)胞之細(xì)胞病變在接種后3~4d出現(xiàn),包括細(xì)胞變長、崩解破碎和脫落等。
有時出現(xiàn)核內(nèi)包涵體。病毒復(fù)制時必需依賴于宿主細(xì)胞的某些功能,只能在細(xì)胞分裂最旺盛的DNA合成期以前接種病毒才能發(fā)生有效感染(這也許是CPV對分裂旺盛的心肌細(xì)胞、小腸上皮細(xì)胞以及骨髓干細(xì)胞最具親和力的原因)。在進行病毒初次分離時,細(xì)胞被輕度染毒,病變不明顯,可以繼續(xù)傳代(帶毒傳代)。為了獲得較好的分離培養(yǎng)效果,還可于細(xì)胞分裂的同時接種病毒(同步接毒)。
CPV主要感染犬,也可見于貂、狐、狼等其他犬科動物和鼬科動物。各種年齡、性別和品種的犬均易感。但純種犬和2~4月齡幼犬易感性較高,病死率也最高。本病一年四季均可發(fā)生,以冬、春季多發(fā)。飼養(yǎng)管理條件驟變、長途運輸、寒冷、擁擠等均可促使本病發(fā)生。病犬為主要傳染源,早期可通過糞便向外界排毒,病毒粒子散在,傳染性最強。后期由于腸黏膜分泌的IgA和隨出血進入腸道中的血液IgM特異性抗體的增多,病毒被凝集在一起,感染性降低?祻(fù)犬仍可長期通過糞便排毒。健康犬主要通過飲水等經(jīng)消化道感染病毒。因此,對病犬污染的飼具、用具、運輸工具和飼養(yǎng)人員等進行嚴(yán)格消毒是防止本病傳播的主要措施。
潛伏期為7~14d。多數(shù)呈現(xiàn)腸炎綜合征,少數(shù)呈現(xiàn)心肌炎綜合征。腸炎病犬表現(xiàn)為經(jīng)1~2d的厭食、軟便,間或體溫升高之后,迅速發(fā)展成為頻繁嘔吐和劇烈腹瀉,排出惡臭的醬油樣或番茄汁樣血便,并迅速出現(xiàn)眼球下陷、皮膚失去彈性等脫水癥狀,很快呈現(xiàn)耳鼻發(fā)涼、末梢循環(huán)障礙、精神高度沉郁等休克狀態(tài)。血液檢查可見紅細(xì)胞壓積增加,白細(xì)胞減少。常在3~4d內(nèi)昏迷而死。
呈心肌炎綜合征的病犬多見于流行初期,或缺少母源抗體的4~6周齡幼犬。常突發(fā)無先兆的心力衰竭,或在腸炎康復(fù)之后,突發(fā)充血性心力衰竭。表現(xiàn)為呻吟、干咳,黏膜發(fā)紺,呼吸極度困難。心有雜音,心跳加快,常在數(shù)小時內(nèi)死亡。
剖檢可見眼球下陷、腹部蜷縮,極度消瘦脫水及肛門周圍附有血樣稀便。血液黏稠暗紫,嚴(yán)重時腸管外觀紫紅。腸系膜血管呈樹枝狀充血,淋巴結(jié)出血水腫,切面呈大理石樣。小腸黏膜出血、壞死,甚至脫落,內(nèi)容物呈醬油樣或果醬樣。胸腺可見萎縮、水腫,肝、脾僅見淤血變化。死于心肌炎綜合征的尸體,則見肺臟局部充血、出血及水腫,心肌紅黃相間呈虎斑狀,有時有灶狀出血。
組織學(xué)檢查,腸炎綜合征型的最突出變化是小腸隱窩上皮壞死脫落,固有層見有充血、出血和炎性細(xì)胞浸潤。淋巴組織嚴(yán)重壞死、衰竭,上皮細(xì)胞中有時可發(fā)現(xiàn)包涵體。胸腺間質(zhì)水腫,皮質(zhì)細(xì)胞減少,胸腺小體發(fā)生玻璃樣變。心肌炎綜合征型的組織學(xué)特征則為心肌纖維的彌漫性淋巴細(xì)胞浸潤,間質(zhì)水腫與局限性心肌變性,呈典型的非化膿性心肌炎變化,在病變的心肌細(xì)胞中有時可發(fā)現(xiàn)包涵體和CPV粒子。
在犬場中,離乳不久的仔犬幾乎同時發(fā)生嘔吐、腹瀉、脫水等腸炎綜合征,而且排出的稀糞惡臭帶血,死亡率很高,就應(yīng)懷疑為CPV感染。但由于腸炎型犬瘟熱、犬冠狀病毒、輪狀病毒感染,以及某些細(xì)菌、寄生蟲感染和急性胰腺炎,也常呈現(xiàn)腸炎綜合征,所以診斷時一定要注意鑒別。
血凝與血凝抑制試驗此法最為簡便、經(jīng)濟、適用,既可迅速檢出糞便提取物和細(xì)胞培養(yǎng)物中的CPV抗原,也可很快檢出血清和糞液中存在的CPV抗體。方法是用0.015mol/L,pH7.0的PBS將經(jīng)氯仿處理的糞便提取物或細(xì)胞培養(yǎng)液,在V型微量血凝板上作2倍連續(xù)稀釋,加新鮮或醛化的豬或猴紅細(xì)胞懸液,于4℃靜置lh后即可判定。為檢查后期糞便中出現(xiàn)的IgM等抗體以及被此種抗體凝集失去血凝活性的CPV抗原。夏咸柱等采用加二疏基乙醇(2-ME)處理的辦法,使其得到了解決。
電鏡與免疫電鏡觀察有條件的單位,可直接用糞便的上清液做電鏡負(fù)染檢查。此法尤其適用于后期病毒被凝集成團失去血凝性的CPV感染,也可同時發(fā)現(xiàn)犬瘟熱、犬冠狀病毒、輪狀病毒等其他病毒感染。如僅發(fā)現(xiàn)少量散在的CPV樣粒子,為區(qū)別是CPV還是無致病性的非致病性犬微小病毒MVC,可加CPV特異血清感作,進行免疫電鏡觀察。
病毒分離鑒定對于新疫區(qū),或為了對流行毒株進行研究比較,可采用此法。將除菌的糞便提取物,于細(xì)胞分種的同時,接種貓腎原代或傳代細(xì)胞,并采用接毒細(xì)胞傳代的方法,?裳杆俜蛛x出CPV。為提高分離率,最好采用早期病毒尚未被IgM等抗體作用的病料。感染的指標(biāo)以檢測培養(yǎng)物的血凝性最為簡便,也可用特異熒光抗體檢查感染的細(xì)胞。
酶聯(lián)免疫吸附試驗采用雙抗體夾心法,應(yīng)用特制的酶標(biāo)反應(yīng)小管、板或纖維素膜,國內(nèi)外已研制出多種可供臨床應(yīng)用的試劑盒。國內(nèi)田克恭等用CPV單克隆酶標(biāo)抗體制成CPV快速診斷盒,可在2h內(nèi)檢出糞樣中的CPV抗原。
其他隨著分子病毒學(xué)的發(fā)展,CPV的核酸探針和PCR診斷技術(shù)得以應(yīng)用,國內(nèi)外已有多篇成功的報道。國內(nèi)研究了CPV核酸探針和PC【鵝價格行情】R診斷技術(shù),已開始試用于臨床與科研。
CPV感染的特點是病程短急、惡化迅速,心肌炎綜合征型病例常來不及救治即死亡;腸炎綜合征型病犬及時合理治療,可明顯降低死亡率。常用的方法是在早期大劑量注射高免血清(每千克體重0.5~1.0ml)的同時,進行強心、補液、抗菌、消炎、抗休克等中西結(jié)合對癥治療,同時注意保暖、禁食等護理。實踐證明,在腹瀉期間,停喂牛奶、雞蛋、肉類等高脂肪高蛋白食物,有利于減輕胃腸負(fù)擔(dān),提高治愈率。補液可根據(jù)犬的脫水程度與全身狀況,決定所需添加的具體成分和靜脈滴注量。通常在5%的糖鹽水中加VC、ATP、抗生素等,分上、下午2次靜脈滴注。嘔吐嚴(yán)重的可肌注愛茂爾、滅吐靈。休克癥狀明顯的可肌注地塞米松或鹽酸山茛菪堿注射液(654-2)。中國人民解放軍軍需大學(xué)軍事獸醫(yī)研究所研制的純中藥制劑犬痢康膠囊,止瀉作用特別明顯。用口服補液鹽(NaCl 3.5g, NaHCO32.5g, KC1 1.5g,葡萄糖20g,加水至1000ml)深部灌腸或任其自飲,對糾正酸中毒、電解質(zhì)紊www.med126.com亂和脫水,也可收到明顯的效果。
CPV感染的根本措施在于免疫預(yù)防,國內(nèi)外已研制成功多種CPV單苗與聯(lián)苗。歸納起來不外有兩大類,一為滅活苗,另一為弱毒苗;蚬こ桃呙缟性谘芯恐。
滅活苗有臟器毒濃縮提純滅活苗和強毒細(xì)胞培養(yǎng)滅活苗。多數(shù)加有氫氧化鋁、磷酸鋁等佐劑,滅活劑為β-丙內(nèi)酯或福爾馬林。此類疫苗安全性好,不存在毒力返祖的危險。但需要有足夠的病毒量,必須經(jīng)過高度濃縮,而且免疫力需較長的時間才能產(chǎn)生,一般需經(jīng)2次以上的免疫才能產(chǎn)生有效的保護(約需4周的時間),免疫期大約可維持6個月,母源抗體同樣對其有干擾作用。
弱毒苗有貓源與犬源2種。根據(jù)貓泛白細(xì)胞減少癥(FPV)對CPV有交叉免疫作用,國外最先用貓瘟熱弱毒疫苗作CPV感染的免疫試驗,結(jié)果雖可產(chǎn)生一定的保護作用,但不完全,且免疫期較短,后改用來自于CPV的弱毒疫苗。接種前CPV HI抗體低于1:10的犬,95%可產(chǎn)生免疫應(yīng)答,但接種前HI抗體達1:20的犬,約有50%的犬不能產(chǎn)生免疫保護。CPV感染的最低抗體保護值為1:80。仔犬母源抗體的半衰期平均為9.5d,這樣,具有中等母源抗體水平的犬也需12~16周齡才能降低至1:20以下,但實際上等不到12周齡,這些犬就有可能被CPV感染發(fā)病了。這就帶來CPV弱毒疫苗的免疫時機與免疫程序問題。安全區(qū)可于10~12周齡進行第1次免疫,以后每隔2~3周免疫1次,連續(xù)免疫2~3次,可產(chǎn)生1年以上的免疫保護。對疫區(qū)受CPV感染威脅或缺少母源抗體的犬,則應(yīng)提前到6~8周齡進行首免,然后按上述進行2~3次的連續(xù)免疫。國內(nèi)夏咸柱等用從犬科動物貉中分得的一株CPV自然弱毒,免疫預(yù)防CPV感染,試驗證明對仔犬母源抗體有較強的抵抗力,因而免疫效果優(yōu)于進口疫苗。將其與犬狂犬病、犬瘟熱、副流感、傳染性肝炎弱毒聯(lián)合,制成犬五聯(lián)弱毒疫苗,經(jīng)20余萬只犬臨床應(yīng)用試驗證明仍然安全有效,不存在免疫干擾,但與國外生產(chǎn)的聯(lián)苗一樣,不能用于緊急預(yù)防。對有可能處于潛伏期的動物,須先注射高免血清,觀察1~2周無異常時,再按免疫程序免疫。