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中國(guó)幽門螺桿菌研究:幽門螺桿菌感染的診斷進(jìn)展

幽門螺桿菌(Helicobacterpyloir,Hp)是慢性B型胃炎的主要原因,與非潰瘍性消化不良,胃和十二指腸潰瘍及胃癌關(guān)系密切。流行病學(xué)研究表明,在國(guó)人無癥狀或健康人群Hp總感染率在33.9%~49.6%;在慢性胃炎Hp檢出率為50%~80%,胃潰瘍?yōu)?0%~80%,十二指腸潰瘍?yōu)?0%…

幽門螺桿菌(Helicobacterpyloir,Hp)是慢性B型胃炎的主要原因,與非潰瘍性消化不良,胃和十二指腸潰瘍及胃癌關(guān)系密切。流行病學(xué)研究表明,在國(guó)人無癥狀或健康人群Hp總感染率在33.9%~49.6%;在慢性胃炎Hp檢出率為50%~80%,胃潰瘍為70%~80%,十二指腸潰瘍?yōu)?0%~100%。但Hp感染缺乏臨床表現(xiàn)的特征,因而目前仍主要靠實(shí)驗(yàn)室診斷。以前國(guó)內(nèi)外診斷Hp的方法無外三大類,一是直接從胃粘膜中檢測(cè)Hp,包括細(xì)菌培養(yǎng)、組織涂片和切片染色;二是尿素酶試驗(yàn)或呼吸試驗(yàn)診斷Hp;三是免疫學(xué)方法,如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等。近年來通過多項(xiàng)研究和方法改進(jìn),可克服某些不足之處,下面將國(guó)內(nèi)Hp感染的診斷方法研究近況作一簡(jiǎn)述。

1 通過胃鏡

1.1 病灶沖洗法下接涂片

組織涂片革蘭染色法檢測(cè)Hp感染簡(jiǎn)便、快速、敏感性可達(dá)80%以上,但也有低于50%的檢出率,除與檢驗(yàn)醫(yī)師經(jīng)驗(yàn)有關(guān),還與取材部位和Hp數(shù)量有關(guān)。新近何松等對(duì)52例慢性胃炎患者在切取胃竇部病變區(qū)組織活檢的同時(shí),內(nèi)鏡下用生理鹽水對(duì)病灶沖洗,將總洗液離心后制成涂片比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)涂片Hp陽(yáng)性率明顯高于切片方法(53.9%比38.5%),認(rèn)為沖洗法覆蓋面大,可廣泛、反復(fù)沖洗,取材較活檢更全面,可提高Hp檢出率。

1.2 胃鏡下直接顯色法

Hp菌體內(nèi)含豐富尿素酶能分解尿素,改變pH值。根據(jù)這一原理,李增燦等用粉紅色素噴灑胃粘膜方法對(duì)100例慢性胃炎研究結(jié)果顯示,粉紅色素噴灑法著色率68%;傳統(tǒng)切片法HP陽(yáng)性率為60%;胃潰瘍25例著色法陽(yáng)性率80%,切片法72%;十二指腸潰瘍50例,著色法陽(yáng)性率90%,切片法為80%,表明切片法存在假陰性,而胃鏡下直接顯色法可提高Hp的檢出率。

1.3 尿素酶活性測(cè)定Hp

目前診斷Hp常采用的細(xì)菌培養(yǎng),組織染色及尿素酶試驗(yàn)等方法均需內(nèi)鏡取材,且方繁瑣,費(fèi)時(shí),并且結(jié)果受Hp斑片狀分布的影響。崔東來等根據(jù)Hp產(chǎn)生大量尿素酶的原理,采用尿素酶活性診斷Hp,Hp感染者尿素酶活性明顯高于無Hp感染者,以尿素酶活性0.31作為截?cái)嘀,其診斷Hp的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性分別為95%、84%和93%,而且認(rèn)為尿素酶活性診斷Hp快速、簡(jiǎn)便,不受血尿素氮影響等優(yōu)點(diǎn),也比測(cè)定胃液尿素氮方法優(yōu)越。

2 血清學(xué)

2.1 ELISA法

通過血清中Hp抗體測(cè)定Hp感染的方法比較多,有ELISA法、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、單克隆抗體測(cè)定法、免疫印跡試驗(yàn)、被動(dòng)血凝試驗(yàn)和細(xì)菌凝集試驗(yàn)等,尤其是ELISA法應(yīng)用最廣。Hp感染后很快會(huì)激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性體免疫,血清中出現(xiàn)IgG,IgA,IgM抗體,國(guó)內(nèi)外多采用ELISA法檢測(cè)HpIgG抗體。

2.1.1 HpIgG測(cè)定

在廣州地區(qū)一項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查Hp感染率研究中,經(jīng)1848例人群Hp感染分析,并經(jīng)組織病理學(xué)和細(xì)菌培養(yǎng)比較,認(rèn)為測(cè)定HpIgG抗體診斷Hp感染其敏感性和特異性分別達(dá)100%和91%。劉勤儉等對(duì)235例人群及20多個(gè)家庭Hp感染調(diào)查時(shí),用間接ELISA法檢測(cè)血清HpIgG抗體,其敏感性和特異性分別達(dá)94%和85%。新近童明慶等介紹了一種斑點(diǎn)—ELISA技術(shù),經(jīng)對(duì)18例慢性胃炎、消化性潰瘍患者,19例兒童和22例正常成人行HpIgG抗體測(cè)定,患者組抗體檢出率72.2%,與快速尿素酶法相比,符合率為83.3%,診斷的敏感性和特異性分別為91.7%和66.7%。認(rèn)為本法克服了快速尿素酶法需胃鏡取材的缺點(diǎn),因而較適合臨床Hp感染的初篩檢查和流行病學(xué)研究。

2.1.2 HpIgA測(cè)定

最近王正祥等經(jīng)用間接ELISA法檢查血清HpIgG抗體和IgA抗體比較,結(jié)果在胃炎抗HpIgG陽(yáng)性率達(dá)82.3%(93/113);Hp現(xiàn)感染率74.3%(84/113);在抗HpIgG陽(yáng)性標(biāo)本中有11.8%(11/93)經(jīng)Hp培養(yǎng)和(或)涂片陽(yáng)性,而在抗HpIgA陽(yáng)性標(biāo)本中僅2.6%(2/78)經(jīng)Hp培養(yǎng)和(或)涂片陰性,因而認(rèn)為抗HpIgA升高比抗HpIgG升高更能反映機(jī)體正被Hp感染.可作為Hp現(xiàn)感染的診斷指標(biāo),而抗HpIgG可作為胃炎患者初篩及Hp感染的流行病學(xué)研究的指標(biāo)。

2.1.3 尿素酶檢測(cè)

在行ELISA試驗(yàn)時(shí)最重要的是抗原的選擇,以前使用的一些抗原制備是應(yīng)用全菌或全菌超聲粉碎物作抗原,這種抗原制備含有多種菌體及鞭毛蛋白,其中有些物質(zhì)或不具備抗原性、或?yàn)槠渌N所共有,如Hp與空腸彎曲菌有血清交叉反應(yīng)等因素。因而試驗(yàn)的敏感性高,但缺乏特異性,酸提取法雖較純凈,但特異性和敏感性不理想。有研究人員,采用柱層析法純化了Hp的尿素酶,并用該尿素酶作ELISA測(cè)定包被抗原,對(duì)120例有消化不良癥狀的血清www.med126.com進(jìn)行檢測(cè),平均光密度值在Hp陽(yáng)性組明顯高于Hp陰性組,如以0.3光密度值為標(biāo)準(zhǔn),診斷的敏感性和特異性分別為95%和91%。因而認(rèn)為用尿素酶作為抗原應(yīng)用于ELISA試驗(yàn)具有良好的特異性和敏感性。

2.1.4 單克隆抗體測(cè)定法

有研究人員介紹了HpmAbs(單克隆抗體)免疫過氧化物酶染以法診斷Hp感染,用ELISA法將HpmAbs與已知細(xì)菌反應(yīng),結(jié)果HpA值明顯高于其它細(xì)菌,因而認(rèn)為HpmAbs為Hp分離純化后的鑒定提供了手段。

2.2 聚合酶鏈反應(yīng)法

診斷Hp感染的方法很多,但他們有一共同特點(diǎn)是不能達(dá)到足夠的敏感性,尤其是不能準(zhǔn)確判斷治療后Hp是否被徹底清除。王蔚虹等采用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase chainreaction,PCR)探討其在Hp診斷和評(píng)價(jià)治療后根治效果中的意義,結(jié)果PCR方法檢測(cè)胃粘膜活檢標(biāo)本中的Hp,簡(jiǎn)便、快速、具有高度敏感性,可檢出最小HpDNA量為0.1pg,特異性達(dá)100%,對(duì)其它細(xì)菌及無Hp感染人胃粘膜呈陰性反應(yīng)。PCR用于Hp感染診斷與尿素酶試驗(yàn)、細(xì)菌培及銀染色法比較,更敏感,而且PCR可檢出常規(guī)方法不能檢出的Hp。楊海濤等將巢式PCR在牙斑中檢出Hp,其特異性達(dá)100%,敏感性達(dá)到可檢測(cè)0.1fg細(xì)菌DNA的水平。

由于不同實(shí)驗(yàn)方法可得出不同結(jié)論,因而需要正確加以評(píng)價(jià)。如牙斑中存在Hp是否為主要傳染源意見尚不一致。1991年Desai等用尿素酶試驗(yàn)對(duì)43例消化不良患者的牙斑中、胃竇及胃粘膜標(biāo)本標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)陽(yáng)性率分別為98%,67%和70%,認(rèn)為牙斑中Hp是主要傳染源。宋群生等用尿素酶試驗(yàn)、細(xì)菌培養(yǎng)和免疫熒光抗體染色和電鏡觀察,也發(fā)現(xiàn)消化性潰瘍、慢性胃炎及胃癌等患者牙斑中可有大量Hp存在,其形態(tài)學(xué)、生化特性和免疫特性均與胃粘膜Hp相似。從牙斑的直接快速尿互酶試驗(yàn)和抗Hp免疫熒光抗體染色結(jié)果看,胃粘膜上有Hp,牙斑中也有Hp ;胃粘膜上未發(fā)現(xiàn)Hp者,牙斑中也有Hp寄生,且牙斑中的Hp數(shù)量、密度均高于胃粘膜。但相反意見認(rèn)為,Hp有尿素酶,可分解尿素,使pH升高,當(dāng)pH高于6.8時(shí),酚紅由黃色變紅色,而單純口腔內(nèi)的pH值足以使尿素酶試驗(yàn)呈陽(yáng)性結(jié)果并不能肯定是Hp感染。根據(jù)對(duì)21例患者用N-PCR法測(cè)定胃粘膜Hp 陽(yáng)性者,8例牙斑中也檢出Hp,而胃粘膜陰性者,牙斑Hp均陰性,提示牙斑中僅有少量Hp存在。

3 核素標(biāo)記呼氣試驗(yàn)

Hp具有較強(qiáng)的內(nèi)源性尿素酶,能分解胃內(nèi)及核素標(biāo)記的尿素,產(chǎn)生CO2和NH3,CO2被吸收后經(jīng)肺呼出,因此只需分析呼氣中的14C或13C即可診斷Hp的存在。國(guó)內(nèi)也采用13C-尿素為示蹤劑診斷Hp感染,認(rèn)為具有較好診斷價(jià)值,但受技術(shù)條件和價(jià)格所限,不適合國(guó)內(nèi)m.payment-defi.com,尤其基層醫(yī)院開展。

綜上的述,Hp感染的診斷方法比較多,快速尿素酶試驗(yàn)、尿素酶活性試驗(yàn)、直接顯色法、涂片革蘭染色法、組織切片染色等簡(jiǎn)便、易行;血清學(xué)檢查尤適用于流行病學(xué)調(diào)查,而PCR主法對(duì)判斷治療后Hp的根除情況更為準(zhǔn)確,不同研究目的,采用不同方法似乎更妥善。

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