1、分配柱色譜:載體主要有硅膠、硅藻土及纖維素粉等。
分離水溶性或極性較大的成分如生物堿、苷類、糖類、有機(jī)酸等化合物時(shí),固定相多采用強(qiáng)極性溶劑,如水、緩沖溶液 等,流動(dòng)相則用氯仿、乙酸乙酯、丁醇等弱極性有機(jī)溶劑,稱之為正相色譜:
分離脂溶性化合物,如高級(jí)脂肪醫(yī)學(xué) 全在.線提供
www.med126.com酸、油脂、游離甾體等時(shí),固定相可用石蠟油,流動(dòng)相 用水或甲醇等強(qiáng)極性溶劑,稱為反相分配色譜。
2、吸附色譜法應(yīng)用
。1)硅膠、氧化鋁吸附柱色譜過程中,吸附劑的用量一般為樣品量的30-60倍。樣品極性較小、難以分離者,吸附劑用量可適當(dāng)提高至樣品量的100-200倍。
。2)硅膠、氧化鋁吸附柱色譜,應(yīng)盡可能選用極性小的溶劑裝柱和溶解樣品,以利于樣品在吸附劑柱上形成狹窄的原始譜帶。
。3)洗脫所用溶劑的極性宜逐步增加。
(4)為避免發(fā)生化學(xué)吸附,酸性物質(zhì)宜用硅膠,堿性物質(zhì)則宜用氧化鋁進(jìn)行分離。
3、聚酰胺吸附色譜法
聚酰胺(polyamide)吸附屬于氫鍵吸附,特別適合分離酚類、醌類、黃酮類化合物。
。1)聚酰胺的性質(zhì)及吸附原理
酰胺羰基與酚類、黃酮類化合物的酚羥基,或酰胺鍵上的游離氨基與醌類、脂肪羧酸上的羰基形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附。創(chuàng)吸附強(qiáng)弱則取決于各種化合物與之形成氫鍵締合的能力。
、 形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多,吸附能力越強(qiáng)。
、 成鍵位置對(duì)吸附力也有影響。易形成分于內(nèi)氫鍵者,其在聚酰胺上的吸附相對(duì)減弱。
、 分子中芳香化程度高者,則吸附性增強(qiáng);反之,則減弱。
一般情況下,各種溶劑在聚酸胺柱上的洗脫能力由弱至強(qiáng),可大致排列成下列順序;水→甲醇→丙酮→氫氧化鈉水溶液→甲酰胺→二甲基甲酰胺→
尿素水溶液
。2)聚酰胺色譜的應(yīng)用
聚酰胺對(duì)一般酚類、黃酮類化合物的吸附是可逆的(鞣質(zhì)例外),特別適用于該類化合物的制備分離,可用于植物粗提物的脫鞣質(zhì)。此外,對(duì)生物堿、萜類、甾體、糖類、醫(yī)學(xué)全在線
www.med126.com氨基酸等極性與非極性化合物也有著廣泛的用途。
4、大孔吸附樹脂
(1)大孔吸附樹脂的吸附原理:大孔吸附樹脂是吸附性和分子篩性原理相結(jié)合的分子材料。吸附性是由于范德華引力或產(chǎn)生氫鍵的結(jié)果,分子篩性是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定的。
(2)影響吸附的因素:大孔吸附樹脂本身的性質(zhì)、溶劑的性質(zhì)和化合物的性質(zhì)是影響吸附的3個(gè)重要因素。
。3)大孔吸附樹脂的應(yīng)用:苷與糖類的分離,生物堿的精制,多糖、黃酮、三萜類化合物的分離。
。4)洗脫液的選擇:洗脫液可使用甲醇、
乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。