分光光度法
第一節(jié) 紫外—可見(jiàn)分光光度法
一、基本原理
紫外—可見(jiàn)吸收光譜屬分子吸收光譜，是由分子的外層價(jià)電子躍遷產(chǎn)生的。
Lambert-Beer定律 A＝ECL
A為吸收度，E為吸收系數(shù)，C為被測(cè)物質(zhì)溶液濃度，L為光路長(zhǎng)度。吸收系數(shù)E是物質(zhì)的物理常數(shù)，隨濃度C單位的不同有不同表示方法。
藥品檢驗(yàn)中使用百分吸收系數(shù) ，物理意義是當(dāng)吸光物質(zhì)溶液濃度為1%(1g/100 ml)，液層厚度為1cm時(shí)的吸收度。醫(yī) 學(xué)全,在線.搜集.整理m.payment-defi.com
二、可見(jiàn)－紫外分光光度計(jì)
光源－單色器－吸收池－檢測(cè)器－數(shù)據(jù)記錄和處理
1.光源：紫外區(qū)采用氫燈或氘燈，可見(jiàn)光區(qū)采用鎢燈
2.單色器：狹縫寬度大，單色光純度差；寬度過(guò)小，檢測(cè)靈敏度降低
3.吸收池：玻璃池適用于370nm以上的可見(jiàn)光區(qū)，石英池適用于紫外、可見(jiàn)光區(qū)，通常僅在紫外光區(qū)使用
三、吸收度的測(cè)定方法
1.對(duì)溶劑的要求：能充分溶解樣品，與樣品無(wú)相互作用，揮發(fā)性小，在測(cè)定波長(zhǎng)處的吸收應(yīng)符合要求
2.空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)：將溶劑裝入?yún)⒈瘸兀{(diào)節(jié)吸收度為0，去除溶劑和容器吸收、光散射、反射的影響。
3.測(cè)定波長(zhǎng)確證
4.供試品溶液濃度：使吸收度在0.3～0.7范圍內(nèi)。
5.狹縫寬度：以減少狹縫寬度時(shí)，供試品溶液吸收度不再增加為準(zhǔn)。
五、應(yīng)用
1.鑒別
(1) 對(duì)比吸收光譜特征參數(shù)：核對(duì)供試品溶液λmax、、A是否符合規(guī)定�？赏瑫r(shí)用幾個(gè)峰位作為鑒別依據(jù)
(2) 比較吸收度比值一致性：吸收峰較多時(shí)，規(guī)定幾個(gè)波長(zhǎng)處吸收度比值作為鑒定標(biāo)準(zhǔn)
(3) 對(duì)比吸收光譜一致性
2.雜質(zhì)檢查
藥物在紫外-可見(jiàn)光區(qū)有明顯吸收，而雜質(zhì)吸收弱；或雜質(zhì)有明顯吸收而藥物無(wú)吸收，可通過(guò)控制吸收度限度來(lái)控制雜質(zhì)量。
3.含量測(cè)定
(1) 對(duì)照品比較法：供試品溶液和對(duì)照品溶液濃度及測(cè)定條件應(yīng)盡可能一致
(2) 吸收系數(shù)法：需對(duì)儀器進(jìn)行嚴(yán)格校正和檢定
(3) 計(jì)算分光光度法：通過(guò)數(shù)學(xué)處理消除樣品中干擾組分的干擾
(4) 比色法：供試品與對(duì)照品同時(shí)操作醫(yī),學(xué).全,在.線m.payment-defi.com
第二節(jié) 熒光分析法
一、基本原理
熒光的產(chǎn)生：此化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲(chǔ)存能量（如光能、化學(xué)能等)而進(jìn)入激發(fā)態(tài)，當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時(shí)，過(guò)剩的能量可以電磁輻射的形式放射（即發(fā)光)。熒光發(fā)射的特點(diǎn)是：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光；而一旦停止供能，發(fā)光（熒光)現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失。
發(fā)射熒光的光量子數(shù)亦即熒光強(qiáng)度，除受激發(fā)光強(qiáng)度影響外，也與激發(fā)光的波長(zhǎng)有關(guān)。各個(gè)熒光分子有其特定的吸收光譜和發(fā)射光譜（熒光光譜)，即在某一特定波長(zhǎng)處有最大吸收峰和最大發(fā)射峰。選擇激發(fā)光波長(zhǎng)量接近于熒光分子的最大吸收峰
物質(zhì)的激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，可以用作該物質(zhì)的定性分析。當(dāng)激發(fā)光強(qiáng)度、波長(zhǎng)、所用溶劑及溫度等條件固定時(shí)，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其發(fā)射光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系，可以用作定量分析。熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法為高，濃度太大的溶液會(huì)有“自熄滅”作用，故熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行�！�
二、熒光分光光度計(jì)
激發(fā)光源→激發(fā)光單色器→樣品池
↓
發(fā)射光單色器→檢測(cè)器→數(shù)據(jù)記錄處理
樣品池用低熒光材料制成，四面透光，發(fā)射光方向與激發(fā)光成直角。
三、應(yīng)用
熒光分析可用于鑒別和含量測(cè)定。一般采用對(duì)照品比較法測(cè)定含量，靈敏度高、選擇性好，但干擾多、線性范圍窄，多用于需要高靈敏度和允許較大變異性的樣品分析。
第三節(jié) 紅外分光光度法
一、基本原理
紅外光譜是由分子的振動(dòng)、轉(zhuǎn)動(dòng)能極引起的光譜。當(dāng)用一定頻率的紅外光照射某物質(zhì)分子時(shí)，若該物質(zhì)的分子中某基團(tuán)的振動(dòng)頻率與它相同，則此物質(zhì)就能吸收這種紅外光，使分子由振動(dòng)基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)。
因此，若用不同頻率的紅外光依次通過(guò)測(cè)定分子時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)不同強(qiáng)弱的吸收現(xiàn)象。用Ｔ％－λ作圖就得到其紅外光吸收光譜。m.payment-defi.com紅外光譜具有很高的特征性，每種化合物都具有特征的紅外光譜。用它可進(jìn)行物質(zhì)的結(jié)構(gòu)分析和定量測(cè)定。
二、紅外光譜儀
光源－吸收池－單色器－檢測(cè)器－數(shù)據(jù)記錄和處理
三、紅外光譜與物質(zhì)結(jié)構(gòu)的關(guān)系
一般將振動(dòng)形式分成兩類：伸縮振動(dòng)和變形振動(dòng)。
（1)伸縮振動(dòng)
表示。n原子沿鍵軸方向伸縮，鍵長(zhǎng)發(fā)生變化而鍵角不變的振動(dòng)稱為伸縮振動(dòng)，用符號(hào)ν
（2)變形振動(dòng)（又稱彎曲振動(dòng)或變角振動(dòng))
基團(tuán)鍵角發(fā)生周期變化而鍵長(zhǎng)不變的振動(dòng)稱為變形振動(dòng)，面內(nèi)變形振動(dòng)又分為剪式（以δ表示)和平面搖擺振動(dòng)。
紅外光譜區(qū)可分成4000 cm-1 ~1300cm-1和1300 cm-1 ~ 400 cm-1兩個(gè)區(qū)域。最有分析價(jià)值的基團(tuán)頻率在4000 cm-1 ~ 1300 cm-1 之間，這一區(qū)域稱為基團(tuán)頻率區(qū)、官能團(tuán)區(qū)或特征區(qū)。區(qū)內(nèi)的峰是由伸縮振動(dòng)產(chǎn)生的吸收帶，比較稀疏，容易辨認(rèn)，常用于鑒定官能團(tuán)。
四、應(yīng)用
1鑒別：紅外光譜特征性強(qiáng)，鑒別時(shí)按《藥品紅外光譜集》中收載的制備方法制備，與該品種對(duì)照?qǐng)D譜比較應(yīng)一致。m.payment-defi.com
2.檢查：依據(jù)藥物與其同質(zhì)異晶雜質(zhì)在特定波數(shù)的吸收有顯著差異，對(duì)無(wú)效或低效晶型進(jìn)行檢查
