(二)薄層色譜法(Thin Layer Chromatography,TLC):類似紙色譜法,但較簡(jiǎn)便、快速、靈敏、不需特殊設(shè)備,適用于有機(jī)雜質(zhì)的檢查。另外,一般將與主藥有密切相關(guān)的原料、中間體、副產(chǎn)物或分解產(chǎn)物等特殊雜質(zhì)稱為有關(guān)物質(zhì),將甾體類藥物中的特殊雜質(zhì)稱為其它甾體。TLC法按操作方法又可歸納為如下幾種情況:
1、在一定供試品及檢查條件下,不允許有雜質(zhì)斑點(diǎn)存在。
2、選用實(shí)際存在的待檢雜質(zhì)作為雜質(zhì)對(duì)照品。
3、選用可能存在的某種雜質(zhì)作為雜質(zhì)對(duì)照品。
4、將供試品稀釋到適當(dāng)濃度作為雜質(zhì)對(duì)照溶液。
5、選用質(zhì)量符合規(guī)定的與供試品相同的藥物作為雜質(zhì)對(duì)照品。
(三)高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC):本法分離效能高、專屬性強(qiáng)和檢測(cè)靈敏,適用于有機(jī)雜質(zhì),但更多地用于含量測(cè)定。
(四)氣相色譜法(Gas Chromatography,GC):主要用于揮發(fā)性有機(jī)雜質(zhì)和有機(jī)溶劑殘留量的檢查。
1、揮發(fā)性有機(jī)雜質(zhì)測(cè)定方法醫(yī)學(xué)全在線www.med126.com:
(1)面積歸一化法:計(jì)算各雜質(zhì)峰面積及其總和,并求出占總峰面積的百分率,但溶劑峰不計(jì)算在內(nèi)。
(2)主成分自身對(duì)照法:先按供試品規(guī)定的雜質(zhì)限度,將供試品稀釋成一定濃度的溶液,作為對(duì)照溶液,進(jìn)樣,調(diào)節(jié)檢測(cè)器的靈敏度或進(jìn)樣量,使對(duì)照溶液中的主成分色譜面積滿足準(zhǔn)確測(cè)量要求。然后取供試品溶液,進(jìn)樣,記錄時(shí)間,一般應(yīng)為主成分保留時(shí)間的倍數(shù)。根據(jù)測(cè)得的供試品溶液的各雜質(zhì)峰面積及其總和并與對(duì)照溶液主成分的峰面積比較,計(jì)算雜質(zhì)限度。
(3)內(nèi)標(biāo)法測(cè)定雜質(zhì)總量限度:供試品按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法配制不含內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液,注入儀器,記錄色譜圖I;再配制含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液,同法記錄色譜圖II。如果圖I中沒(méi)有與圖II上內(nèi)標(biāo)峰保留時(shí)間相同的雜質(zhì)峰,則圖II中各雜質(zhì)面積之和應(yīng)小于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積(溶劑峰不計(jì)在內(nèi))。
(4)內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)(或主成分)含量。
(5)外標(biāo)法測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)(或主成分)含量。