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單克隆抗體研究中實驗動物的選擇與應用

  一、單克隆抗體技術與實驗動物關系

  雜交瘤(Hybidoma)合成單克隆抗體(Monoclonal Antibodies,McAb)是近年來生物醫(yī)學中的一項重大突破。從根本上解決了免疫學中長期存在的“特異性”和“重復性”問題,在短短的幾年里,在許多不同科學領域內發(fā)揮了巨大作用。

  單克隆抗體技術是在1975年由Kohler和Milstein首創(chuàng)的,他們在60年代發(fā)展起來的細胞雜交技術的基礎上,成功地把兩種細胞融合在一起,一種是已適應體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細胞(都來自BALB/C品系的小鼠)和一種經(jīng)綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞融合,形成雜交細胞,發(fā)現(xiàn)這種融合的雜交細胞兼有兩個親代細胞的特征,即既有骨髓瘤細胞無限生長的能力,又有漿細胞合成單一抗體的能力。因此,這種免疫細胞通過克隆化,成為單克隆系(單一純化的無性繁殖細胞系),就能產(chǎn)生大量單一類型的高純度抗體,這種抗體就叫作“單克隆抗體”,如果把雜交細胞再種入動物體內,可形成“雜交細胞瘤”,瘤子產(chǎn)生大量抗體,就可以從動物體液中抽出含有單克隆抗體的體液,把這種雜交細胞在體外培養(yǎng),培養(yǎng)液中就有大量的單克隆抗體,可供實驗研究和臨床研究使用。

  目前,雜交瘤單克隆護體的應用范圍愈來愈廣泛,已經(jīng)深入到整個生物醫(yī)學的各個領域,諸如生物化學、分子生物學、免疫學、藥理學、病毒學、細菌學、寄生蟲學、腫瘤學、遺傳學、藥物學、血液病學、內分泌學等等。幾乎所有抗原物質都可以應用這項技術獲得針對單一抗原決定簇單克隆抗體。所以,可以說它是一把分子刀,用它可以剖析任何一種抗原物質的細微結構;它又是一種均質的、高特異性的抗體,可用它研究免疫學、遺傳學、腫瘤學和其他學科中各種復雜的現(xiàn)象,同時還可用于診斷各種疾病,包括惡性腫瘤;它又可當作一種藥劑治療某些疾病,甚至腫瘤;還可以用于提純各種蛋白質。

  實驗動物在雜交瘤單克隆抗體技術中占有極為重要的作用。它是形成單克隆抗體的必須條件。正如Milstein指出:如果在理論上沒有克隆選擇學說,在技術上沒有細胞融合(Cell Fusion)和培養(yǎng)方法,在材料上沒有實驗性骨髓瘤和體外培養(yǎng)的髓瘤細胞,就不可能出現(xiàn)單克隆抗體。這充分說明了實驗動物和骨髓瘤細胞系在雜交瘤技術中的重要作用。

  二、常用于淋巴細胞雜交瘤技術的實驗動物

 。ㄒ)小鼠BALB/C系

  它是此技術中最常用的動物。目前用于細胞融合的小鼠骨髓瘤細胞幾乎都來源于BALB/C系小鼠。其雜交瘤可接種于BALB/C或它的雜交第1代小鼠,從帶瘤動物取血清或腹水制備單克隆抗體。

  BALB/C系小鼠起源于Bagg從1913年開始維持的白化株(Albine stock)小鼠,Dowell從1923年開始作近交系培育,至1932年達26代,之后Snell將BALB加C即BALB/C,以前的近交歷史不清,繼之以Andervont為主,使BALB/C廣泛傳播和應用。1973年美國NIH增培育到近交157代。毛色基因為AA、bb、cc(白色)。H-2為d型。亞系有:BALB/cCd,BALB/cJ,BALB/cAnN等。該品系小鼠的主要特性:

  1.免疫學特性:易患慢性肺炎。多數(shù)個體于6月齡以后出現(xiàn)免疫球蛋白過多癥。主要是IgG1和IgA量的增加。免疫球蛋白的絕對量依飼養(yǎng)條件而異。腹腔注射礦物油后可引起漿細胞瘤。發(fā)生率0-60%,依亞系及飼養(yǎng)條件而異。較難誘發(fā)免疫耐受性。醫(yī)學全在線www.med126.com

  2.生理學特性:血壓較高。網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)器官與體重之比較大。大部分雄鼠在20日齡出現(xiàn)脾臟淀粉樣性變。對放射線極度敏感。

  3.癌發(fā)生率:乳腺癌發(fā)生率低(3%),但對致癌因子敏感。腎上腺和肺常發(fā)生,雌鼠的肺癌發(fā)生率為21%,網(wǎng)狀細胞瘤為8%,血管瘤為6%,淋巴肉瘤為4.5%。

  4.老化及壽命:老齡鼠出現(xiàn)心臟病和多發(fā)性動脈硬化癥。平均壽命雄鼠為569~648天,雌鼠561~816天。252日齡平均體重為雄鼠30克雌鼠28克。

  5.對細菌及病毒反應:該品系小鼠對鼠傷寒沙門氏菌C′5敏感,對麻疹病毒中度敏感。

  6.飼養(yǎng)注意點:生育年齡長(至12月齡),容易飼養(yǎng)繁殖,最適稍高溫度。為26-27℃因為體型較細,除了日常飼料外,每日早晚每只各喂1克白面包,每星期喂二次木魚(日本傳統(tǒng)加工食品),稍肥后較易繁殖,根據(jù)我們的飼養(yǎng)經(jīng)驗每周加三次煮熟的雞蛋,效果很為滿意。該品系小鼠易患肺炎,最好不要和其它近交系小鼠同室飼養(yǎng),不使其它近交系小鼠發(fā)病的環(huán)境病原菌易使BALB/C鼠患鼠。

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