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1.4 指標(biāo)檢測(cè)
1.4.1 神經(jīng)功能評(píng)分 再灌注24 h后采用雙盲法按Zea-longa 5分法進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，標(biāo)準(zhǔn)如下：①無(wú)神經(jīng)功能缺失癥狀，計(jì)0分；②不能伸展右側(cè)前肢，計(jì)1分；③爬行時(shí)向右側(cè)轉(zhuǎn)圈，計(jì)2分；④身體向右側(cè)傾倒，計(jì)3分；⑤不能自發(fā)爬行、意識(shí)障礙，計(jì)4分。
1.4.2 HE染色 將各組8只家兔麻醉，以生理鹽水進(jìn)行心臟灌洗，用4℃ 10%多聚甲醛灌洗固定，并迅速斷頭取腦。距額葉前端3 mm和9 mm處進(jìn)行冠狀分離，取中間6 mm厚的腦組織塊，然后沿此腦塊矢狀縫兩側(cè)約2 mm處，從上至下切去兩側(cè)半球的正中結(jié)構(gòu)，將左側(cè)腦塊作為缺血腦組織，制成蠟塊。自前往后連續(xù)冠狀位切片，厚約5 μm。HE染色光學(xué)顯微鏡下（400×)觀察神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化并采圖。
1.4.3 TUNEL染色 嚴(yán)格按照試劑盒檢測(cè)步驟進(jìn)行操作。TUNEL染色在光鏡下（400×)觀察凋亡細(xì)胞（以胞核出現(xiàn)棕黃染色顆粒代表)，計(jì)算TUNEL陽(yáng)性率即TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的比值并采圖。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。神經(jīng)功能評(píng)分中位數(shù)/四分位數(shù)法表示，多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，兩兩比較采用Nemenyi檢驗(yàn)。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 一般狀況及神經(jīng)功能改變
S組家兔對(duì)外界反應(yīng)靈敏，其余4組家兔對(duì)外界反應(yīng)靈敏度不同程度降低，其中以M組最遲鈍，P組最佳。5組家兔神經(jīng)功能評(píng)分比較見(jiàn)表1醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站m.payment-defi.com。
2.2 HE染色的比較
切片經(jīng)HE染色后，光鏡下可見(jiàn)S組神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，胞質(zhì)色淡且均勻，核大而圓，核仁明顯（圖1A)。M組呈明顯的缺血損傷性改變，多數(shù)細(xì)胞體積縮小，胞漿疏松，胞核固縮深染，部分細(xì)胞壞死（圖1B)。經(jīng)吡格列酮預(yù)處理的P組缺血性損傷改變較M組明顯減輕，壞死區(qū)域縮�。▓D1C)，而GP與D組較M組的缺血改變則無(wú)明顯減輕，可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)消失，部分細(xì)胞出現(xiàn)壞死（圖1D和圖1E)。
2.3 TUNEL染色的比較
S組只有少量凋亡細(xì)胞（圖2A)，與其余4組大鼠相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01)。M組凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率為（63.06±9.05%，圖2B)，而經(jīng)吡格列酮預(yù)處理的P組相應(yīng)區(qū)域凋亡細(xì)胞陽(yáng)性率（48.10±7.61%，圖2C)，兩組相比差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01)，而GP與D組較M組的細(xì)胞凋亡率則無(wú)明顯改變。5組大鼠腦組織中凋亡細(xì)胞率比較見(jiàn)表1。
3 討論
既往研究表明，腦缺血再灌注時(shí)神經(jīng)細(xì)胞可介導(dǎo)大量炎性細(xì)胞的聚集和炎性因子的釋放[5]，造成神經(jīng)元凋亡，從而造成對(duì)缺血損傷區(qū)域細(xì)胞的損傷。本研究也發(fā)現(xiàn)模型組中細(xì)胞凋亡數(shù)量相比假手術(shù)組顯著升高。有研究發(fā)現(xiàn)，PPARγ激動(dòng)劑能活化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶而抑制NF-κB的激活[6]。NF-κB可調(diào)控表達(dá)許多參與炎癥反應(yīng)、氧化損傷、免疫反應(yīng)和細(xì)胞凋亡等過(guò)程的蛋白基因。持續(xù)活化在垂死神經(jīng)元中的NF-κB可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，包括重新進(jìn)入細(xì)胞循環(huán)失敗和生成死亡蛋白[7]；炎癥反應(yīng)過(guò)程中釋放一系列細(xì)胞因子信號(hào)降解IκB的激酶（IKK)活化并磷酸化IκB的兩個(gè)Ser殘基，釋放出與IκB相結(jié)合的NF-κB并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核而使目的基因的表達(dá)增加，從而產(chǎn)生大量的炎癥介質(zhì)參與病理生理過(guò)程[8，9]。
