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血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑親和柱介質(zhì)的制備方法

公開(公告)號 CN1175103C  
公開(公告)日 2004.11.10  
申請(專利)號 CN02135868.0  
申請日期 2002.12.10  
專利名稱 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑親和柱介質(zhì)的制備方法  
主分類號 C12N9/00  
分類號 C12N9/00  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 唐勝建  
發(fā)明(設(shè)計)人 任維棟;孫風祥;唐勝建  
地址 261042 山東省濰坊市奎文區(qū)勝利東街288號濰坊醫(yī)學院整形外科研究所  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 淄博科信專利商標代理有限公司  
代理人 杜,F(xiàn)  
國省代碼 山東;37  
主權(quán)項 一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑親和柱介質(zhì)的制備方法,其特征是依次包括以下的步驟:A、配體的制備,將新鮮豬清洗后,剔除大血管、脂肪、切成碎塊,加入溫度為4℃、含0.25mol/L蔗糖的0.05-0.10mol/LTris-HCI緩沖液,該緩沖液的pH值為7.0-7.6,新鮮豬肺與緩沖液的重量體積比按克∶毫升計為3∶10-15,勻漿2-8分鐘,在溫度為4℃條件下4000-9000×g離心30-45分鐘,得上清,再在溫度為0℃條件下進行1.6-2.6mol/L硫酸銨分級沉淀,取沉淀進行透析、去掉硫酸銨、得酶液,將酶液上SephadexG-200凝膠柱,取酶峰部分再進行Q HyperD離子交換層析,再凍干后獲得比活力為1200-1400u/mg的配體;B、親和介質(zhì)的制備,將載體和A步驟制得的配體按g/mmol比例為1∶0.07-0.36的配比,溶于0.2-0.8mol/L氯化鈉溶液中,調(diào)節(jié)pH3.0-9.5,加入交聯(lián)劑,交聯(lián)劑的加入量最終使交聯(lián)劑濃度達到0.02-0.36mol/L,室溫放置1-4小時,然后將樣品轉(zhuǎn)移入具塞的容器中,在溫度為35-40℃的條件下持續(xù)晃動12-20小時,使配體固定在載體上,將固定有配體的載體先用適量蒸餾水沖洗,再用含有0.5-1.5mol/L氯化鈉的20-100mmol/L乙酸鈉沖洗,再繼續(xù)用適量蒸餾水沖洗,最終得到80-110u/g濕重的親和柱介質(zhì),所述的載體包括交聯(lián)葡聚糖類、甲殼糖類、瓊脂糖類或纖維素類,交聯(lián)劑包括戊二醛、溴化氰、碳二亞胺及其衍生物、N-羥基磺酰琥鉑酰亞胺或β-硫酸酯乙砜基苯胺。  
摘要 本發(fā)明涉及一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑親和柱介質(zhì)的制備方法,包括將新鮮豬肺勻漿,離心得上清,再進行硫酸銨分級沉淀,取沉淀進行透析、得酶液,上凝膠柱,取酶峰部分進行離子交換層析,凍干后得配體;將載體和配體按配比溶于氯化鈉溶液中,調(diào)節(jié)pH,加入交聯(lián)劑,室溫放置,然后將樣品轉(zhuǎn)移入具塞容器中,持續(xù)晃動,使配體固定在載體上,將固定有配體的載體用蒸餾水和乙酸鈉沖洗,最終得到80-110u/g濕重的親和柱介質(zhì)。用此親和柱介質(zhì)裝入親和柱,用于膠原蛋白酶解物的純化,其純化倍數(shù)為上一步的200-300倍,用于地龍、銀杏等中草藥中降低血壓有效成分的提純過程,其純化倍數(shù)為160-300倍,遠遠高于其它的層析。  
國際公布  
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