雞李氏桿菌病——雞病大全
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概 述雞李氏桿菌病(Avian Listeriosos)又稱禽
單核細胞增多癥，是由李氏桿菌引起禽類的一種散發(fā)性傳染病。雞感染后主要表現(xiàn)為單核細胞增生性腦膜腦炎、壞死性肝炎和
心肌炎等癥狀。李氏桿菌還易感染家畜和人，重者表現(xiàn)為腦膜腦炎、
流產(chǎn)、
敗血癥和單核細胞增多，輕者表現(xiàn)為
結(jié)膜炎。雞李氏桿菌病引起雞散發(fā)性敗血癥，死亡率通常較低，但有時也可高達52％～100％。本病死亡率高低常與是否存在其他疾病混合感染有關(guān)。病 原李氏桿菌是一種球桿菌，大小為0.4～0.6μm×0.5～2μm，在
兔血瓊脂培養(yǎng)基上生長可長成長達3～30μm的菌絲。普通瓊脂培養(yǎng)出的菌體較體內(nèi)和含1％
葡萄糖瓊脂培養(yǎng)出的小，菌體一般為0.4～0.6μm。菌體多呈單個散在排列，有時呈V字形成對排列，有時呈短鏈排列。李氏桿菌在22℃和37℃時能生長，22～25℃時可形成4根鞭毛，具有運動性。而在37℃時菌體一般不長鞭毛或只長
單鞭毛，運動性減弱以至消失。本菌無芽胞、一般無莢膜，革蘭氏染色陽性。但是，在血清
葡萄糖蛋白胨中能形成粘多糖莢膜。老齡培養(yǎng)物有時脫色為陰性，菌體染色常呈兩極濃染，容易誤認為是雙球菌。本菌屬需氧兼性厭氧菌，在普通瓊脂上生長不好，在含血清或血液的瓊脂上生長較好，在血瓊脂上生長形成狹窄的β溶血環(huán)。當培養(yǎng)基中含1％葡萄糖及2％～3％
甘油時生長更佳。用亞碲酸鉀瓊脂37℃培養(yǎng)24h，呈圓形、隆起、濕潤，直徑平均為0．6mm的黑色菌落。此菌在麥康凱培養(yǎng)基上不生長。據(jù)報道，胰蛋白胨瓊脂是培養(yǎng)和保存活菌的最好培養(yǎng)基，菌體在此培養(yǎng)基上具有純凈透明的特點，低倍鏡下菌落有細膩的表面結(jié)構(gòu)和藍綠色的特殊光澤。肉湯培養(yǎng)呈均勻渾濁，有顆粒狀沉淀，不形成菌環(huán)及菌膜。在半固體培養(yǎng)基上，細菌沿穿刺線呈彌散性生長，距瓊脂表面數(shù)毫米處出現(xiàn)一個倒傘形生長區(qū)，呈松樹狀。李氏桿菌生長范圍為pH5.6～9.8，當小于pH5.6時會死亡。此菌無耐酸能力，在糖發(fā)酵管中分離不到活菌。生長溫度為25～42℃，一般選擇30～38℃培養(yǎng)。動力觀察的最佳溫度為22--25℃培養(yǎng)。能發(fā)酵多種糖類，對葡萄糖、水楊苷，37"C24h內(nèi)產(chǎn)酸，對乳糖、
麥芽糖、蔗糖、阿拉伯糖、山梨醇、甘油和糊精等3～10天產(chǎn)酸或不發(fā)酵，而對
棉籽糖、
肌醇、菊糖、
甘露醇等不發(fā)酵。甲基紅、MR、VP、過氧化氫酶、七葉苷、接觸酶陽性。
尿素酶、明膠、 H2S試驗陰性。不還原硝酸鹽，
石蕊牛乳在24h微酸，但不凝固。李氏桿菌對物理和化學因素抵抗力較強。在土壤、糞便、青貯飼料和干草內(nèi)能長期存活。對堿和鹽的耐受力較強，在20％
食鹽溶液內(nèi)可長期存活，2．5％苛性鈉經(jīng)20min細菌才能被殺死。70％酒精、2．5％石炭酸經(jīng)5min殺死。60～70℃經(jīng)5～10min可殺死。對
青霉素G、氨芐青霉素、
四環(huán)素、
氯霉素、
新霉素和
磺胺嘧啶鈉敏感，其中敏感性最高的是氨芐青霉素。根據(jù)菌體O抗原和鞭毛抗原的不同，最初用凝集素吸收試驗法曾查出本菌有4種抗原型(即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型)，其中有的可再分為若干亞型，Ⅰ型見于豬、禽、嚙齒類，Ⅳ型見于畜禽，人類4個型都可致病，在國外Ⅰ型和Ⅳ型有商品化抗血清。后來又鑒定了12個血清型變種。
流行病學本病易感動物種類甚廣，雞、鴨、火雞、鵝和金絲
雀等對本病易感，其中以各種不同年齡的雞更易感，多呈敗血經(jīng)過。實驗動物中，小鼠、家兔、豚鼠對本菌易感，皮下注射、肌肉注射易引起死亡；Anton試驗表明，家兔或豚鼠點眼，24～36h后可出現(xiàn)膿性結(jié)膜炎�；疾∏蓊惡蛶Ь呤潜静〉膫魅驹�。在禽類糞便和鼻分泌物中可檢出此菌，但在蛋內(nèi)不含此菌。本病的傳播途徑尚不完全了解�？赏ㄟ^消化道、呼吸道、眼結(jié)膜及受傷的皮膚感染。污染的飼料、飲水和吸血昆蟲可能是主要的傳播媒介。李氏桿菌可在土壤中存活1～2年，并能抵抗反復凍融，接觸污染土壤也可感染本病。李氏桿菌在禽類糞便和鼻粘膜中均可短期存在，通常因接觸病禽而迅速傳播此病。本病的流行特點為散發(fā)型，偶爾呈地方性流行，發(fā)病率低，致死率高(52％～100％)。發(fā)病季節(jié)多在3～5月份，冬季亦有發(fā)生。各種年齡的禽類都易感，但幼齡比成年禽易感，發(fā)病也較急，多呈敗血經(jīng)過。在冬季缺乏青飼料、
營養(yǎng)不良，氣候驟變，粘膜抵抗力低下，寄生蟲或沙門氏菌感染、
維生素A和維生素B缺乏時，均可構(gòu)成本病誘因。臨床癥狀李氏桿菌自然感染的潛伏期很不一致，一般為2～3周。本病主要危害2月齡以下的雛雞。發(fā)病前無明顯臨診癥狀，突然發(fā)病。病初精神萎頓，羽毛粗亂，離群孤偶，下痢，食欲不振，雞冠、肉髯發(fā)紺，病禽嚴重
脫水，皮膚呈暗紫色。隨病程發(fā)展，兩翅下垂，兩腿軟弱無力，行動不穩(wěn)，臥地不起，倒地側(cè)臥，兩腿不停劃動。有的則表現(xiàn)為無目的地亂跑、尖叫，頭頸側(cè)彎、仰頭，腿部發(fā)生陣發(fā)性
抽搐，神志不清，最終死亡，病程1～3周。死亡率可高達85％以上。雞的李氏桿菌病多與寄生蟲病、雞白痢、雞
白血病等合并發(fā)生，可使癥狀復雜化。病理變化剖檢可見敗血癥變化。腦膜和腦血管明顯充血。心肌有壞死灶，
心包積液，心冠脂肪出血。肝臟呈
土黃色，腫大，并有黃白色壞死點和深紫色瘀血斑，質(zhì)脆易碎。脾臟腫大，呈黑紅色。腺胃、肌胃和腸粘膜出血，粘膜脫落呈卡他性炎癥。有的腹腔內(nèi)含有大量血樣物。腎亦腫大、炎癥變化。顯微鏡檢查，在變性或壞死的區(qū)域可觀察到大量的單核細胞浸潤，壞死區(qū)及其周圍可見革蘭氏陽性桿菌。腦組織變化，神經(jīng)膠質(zhì)細胞增生以及大腦髓質(zhì)形成血管套。在敗血癥時，常見肝化膿灶及心肌變性。肝、腦病變區(qū)以淋巴細胞、巨噬細胞和漿細胞浸潤為特征。診斷鑒別1．病原學檢查(1)涂片檢查：采病死禽的血液、肝、脾、腎、腦
脊髓液、腦組織等做觸片或涂片，革蘭氏染色，鏡檢有呈單個、V字形或并列的革蘭氏陽性小桿菌。(2)病原分離培養(yǎng)：取腦、淋巴結(jié)或肝等病料，接種于兔鮮血瓊脂培養(yǎng)基、0.05％亞碲酸鹽胰蛋白瓊脂平板、0.1％葡萄糖血清肉湯、Martin瓊脂斜面和Martin肉湯培養(yǎng)基中分離培養(yǎng)。在血瓊脂上菌落周圍有溶血環(huán)；亞碲酸鹽瓊脂上則呈黑色菌落；葡萄糖血清肉湯中呈均勻渾濁，有顆粒狀沉淀，不形成菌環(huán)及菌膜；Martin瓊脂斜面上可見乳白色、大小不一、圓形、邊緣光滑、透明的小菌落；Martin肉湯中呈均勻渾濁，
管底有黃色沉淀。(3)病原體鑒定：取典型的單個菌落經(jīng)純培養(yǎng)后進行生化反應(yīng)。李氏桿菌能發(fā)酵多種糖類，如葡萄糖、麥芽糖、七葉苷、果糖、
海藻糖和水楊素等產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。緩慢發(fā)酵乳糖、蔗糖、阿拉伯糖、半乳糖、
鼠李糖、糊精、山梨醇和甘油。不液化明膠，接觸酶陽性，甲基紅與VP反應(yīng)陽性。不形成吲哚，不分解尿素，不能還原硝酸鹽。(4)動物試驗：病料制成懸液，以普通肉湯(如胰蛋白酶大豆肉湯，腦心浸液)以1：1稀釋，用研缽或勻漿器勻漿。將懸液通過腹腔、腦腔、靜脈注射兔子、小鼠或豚鼠，可很快引起試驗動物敗血死亡。點眼，可出現(xiàn)化膿性結(jié)膜炎，不久發(fā)生敗血死亡。2.血清學診斷血凝抑制試驗(HIA)、補體結(jié)合試驗(CF)、瓊脂擴散試驗(AGP)和免疫熒光試驗(IFA)等可用于本病的診斷。但由于李氏桿菌的自凝性，以及它與金色葡萄球菌、腸球菌等有共同抗原成分，易出現(xiàn)交叉反應(yīng)，所以在運用血清學診斷時受到很多限制。在國外血清I型和Ⅳ型有商品化抗血清可用于血清型鑒定。3.單克隆抗體檢測病原菌(1)應(yīng)用Farber等報道的診斷李氏桿菌鞭毛抗原的單克隆抗體ELISA檢測程序，該法可在2--3天內(nèi)從病料中檢出李氏桿菌，此法不能確定李氏桿菌的種間差異。(2)Buttman研制的15株李氏桿菌屬特異性單克隆抗體構(gòu)成的夾心ELISA檢測方法，可于增菌后24h內(nèi)報告陽性結(jié)果，最低菌濃度檢出為5×105/ml。(3)焦新安等研制的C11、B11和B153株單克隆抗體，采用間接免疫熒光和ELISA的方法可快速檢測出李氏桿菌。(4)范江潔于1995年研制的3株單克隆抗體(LJl0、ALM5和LBll)，具有種間特異性。用LJIOA做包被抗體和酶標抗體建立的夾心ELISA方法，測定人工模擬肉樣至少可測出含5個/g細菌的樣品，并在48h得出結(jié)果。(5)細胞株EM-TG1能穩(wěn)定分泌抗單核細胞增生李氏桿菌的特異單克隆抗體，以此特異的單克隆抗體建立的夾心ELISA方法能于20～24h內(nèi)檢測出含8～10個/g(ml)細菌的樣品。并可區(qū)分單核細胞增生李氏桿菌與非病原性李氏桿菌。4．應(yīng)用分子生物學技術(shù)快速檢測李氏桿菌的方法Datta等研制成功的β溶血性李氏桿菌特異的DNA探針，以核酸雜交和PCR方法快速檢測單核細胞增生李氏桿菌，用核酸探針技術(shù)檢測李氏桿菌，每克樣品中污染一個細菌即可檢測出來，十分敏感、特異，且縮短了檢測時間。到目前為止，許多快速檢測方法還處于實驗室研究階段，要能在實踐中快速、特異、方便地檢測此菌的方法仍有待于繼續(xù)研究。防治措施預防李氏桿菌病，需加強飼養(yǎng)管理，禽舍定期消毒。本病對幼齡雛危害較大，因此加強育雛期的管理，提高機體抵抗力是預防本病的主要措施。同時，注意環(huán)境衛(wèi)生，做好防疫消毒工作，及時發(fā)現(xiàn)清除死雞，隔離治療病雞。場地、用具等用3％石炭酸、3％來蘇兒、2％火堿、5％漂
白粉等嚴格消毒。注意周圍的疫病信息，防止把病畜禽帶入場內(nèi)。發(fā)病后，要選用敏感藥物。氨基青霉素和芐基青霉素G對本病菌有抑制作用。
鏈霉素有較好治療作用，但易產(chǎn)生抗藥性。有報道使用四環(huán)素粉劑，按0.06％～0.1％混入配合飼料內(nèi)，連續(xù)用藥3～5天。
慶大霉素注射液用生理鹽水稀釋后每只雛雞5000～10000單位，肌注，每天1次，連續(xù)用藥2～3天，有較好治療作用。同時也要重視其他病毒性、細菌性疾病的合并感染，做好早期預防工作。
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