三.茚三酮比色法:
1事理:氨基酸在必然pH規(guī)模內(nèi),能與茚三酮生成蘭紫色化合物。可以用比色法定量測定。
2試劑:
(1)磷酸緩沖液(pH.8.04)制備體例如下:
稱磷酸二氫鉀4.5350g。定容500ml
稱NAH2PO4·12H2O 11.9380g分袂消融定容500ml
取磷酸二氫鉀10ml與磷酸氫二鈉190ml同化即為pH8.04的緩沖液
(2)2%茚三酮溶液醫(yī),學.全,在.線m.payment-defi.com:
稱茚三酮1g→溶于35ml熱水→插手40mg氯化亞錫(SnCl2·H2O)攪拌過濾(作防腐劑)→于冷暗處住宿→定容50ml
① 氨基酸標液
稱干燥氨基酸(如異亮氨酸)0.2000g→消融定容100ml→搖勻→吸10ml于此外100ml容量瓶
定容100ml,即得200Ug/ml標液
3操作體例:
(1)繪制尺度曲線:
取7個25ml容量瓶,吸收標液 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0ml于7個25ml容量瓶,加水填補至容積為4ml,然后加茚三酮緩和沖液各1ml,于水浴加熱15分鐘,冷卻后定容25ml,靜置15分鐘,在570nm下測消光值,繪制尺度曲線。
(2)樣品測定:
取樣品5.00~10.0g(液體樣5-10ml)→更甚杯中→加50ml水和活性碳約5g→加熱過濾→用30—40ml熱水洗滌活性炭→吸澄清樣液1~4ml→加茚三酮緩和沖液各1ml水浴加熱15分鐘,冷卻定容,靜置15分鐘于570nm下測定消光值,按下式計較氨基酸含量。
氨基酸含量(毫克/100克)=C/(W×1000)×100來歷:的美男編纂們
C——從尺度曲線上查得得氨基酸的量(Ug)
W——測定燈揭捉品溶液相當于樣品的量(g)
注重事項:
茚三酮受陽光、溫度、濕度、空氣等影響易被氧化呈淡紅或深紅色,使用前要進行純化,體例如下:取10g茚三酮容于40ml熱水中,加一克活性炭,搖勻靜置30分鐘醫(yī),學.全,在.線m.payment-defi.com,過濾,將濾液放入冰箱中過濾,即呈現(xiàn)蘭色結(jié)晶,過濾,用2ml冷水洗滌結(jié)晶,置干耘縵泱中干燥,裝瓶備用。
思慮題:
1 試述卵白質(zhì)測定中,樣品消化過程所必需注重的事項,消化過程中內(nèi)容物顏色發(fā)生什么轉(zhuǎn)變?為什么?
2 樣品經(jīng)消化進行蒸餾前,為什么沖要手氫氧化鈉?這時溶液發(fā)生什么轉(zhuǎn)變?為什么?如不美觀沒有轉(zhuǎn)變,聲名侍趵硎題?須采用什么法子?
3 硫酸銅及硫酸鉀在測定中起了什么浸染?
4 試述氨基酸態(tài)氮的測定事理。
5 結(jié)不美觀計較中為什么要乘上卵白質(zhì)系數(shù)?
嘗試:①水不美觀中酸度的測定。
②糕點中和脂肪的測定。
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