方法名稱: |
金蕎麥—表兒茶素的含量測定—HPLC |
應(yīng)用范圍: |
本方法適用于金蕎麥中表兒茶素含量的測定 |
方法原理: |
本品細(xì)粉加50 %乙醇回流提取,經(jīng)液相色譜分離,在280 nm處測定峰面積,外標(biāo)法計算含量 |
儀器設(shè)備及實驗條件: |
儀器 Waters 600E高效液相色譜儀、2487雙波長紫外檢測器、Millennium32 色譜管理系統(tǒng) 色譜條件 色譜柱:Symmetry C18(150 mm×3.9 mm,5 μm);流動相:水(用磷酸調(diào)pH值至3.00±0.02)—乙腈(92:8);流速:0.8 mL/min;檢測波長:280 nm;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:10 μL |
試樣制備: |
對照品溶液制備 精密稱。-)-表兒茶素對照品適量,加乙腈-水(1:9)制成含(-)-表兒茶素30 μg/mL的溶液,即得。 供試品溶液制備 取本品細(xì)粉約2.5 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入50 %乙醇50 mL,密塞,稱定質(zhì)量,放置過夜,加熱回流1 h,放冷,再稱定質(zhì)量,用50 %乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液25 mL,減壓濃縮至近干,殘渣加乙腈-水(1:9)分次洗滌,洗液轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中,加乙腈-水(1:9)至刻度,搖勻,離心(3000 r/min)5 min,精密量取上清液5 mL,加入聚酰銨柱(30~60目,3 g,內(nèi)徑1.0 cm,濕法裝柱),以水30 mL洗脫,棄去水液,再用甲醇100 mL洗脫,收集洗脫液,減壓濃縮至近干,殘渣加乙腈-水(1:9)使溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中,加乙腈-水(1:9)至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,取續(xù)濾液,即得。 |
操作步驟: |
分別精密吸。-)-表兒茶素對照液以及金蕎麥供試品溶液各10 μL,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定峰面積。以外標(biāo)法計算(-)-表兒茶素含量。 |
附件: |
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備注: |
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參考文獻(xiàn): |
何美珊,錢炳輝,王兆龍等. HPLC法測定金蕎麥中(-)-表兒茶素含量. 中草藥 .2005,36(3)︰441~442 |